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[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张晓威  梁静  夏东  赵茹茜  杨晓静  
为研究脂滴包被蛋白(Perilipin)在猪脂肪组织中的表达分布情况及其与糖皮质激素作用的关系,选取氟烷基因隐性纯合子猪(Halnn)和氟烷基因显性纯合子猪(HalNN)为动物模型,采用半定量实时荧光PCR(rqRT-PCR)技术分析其背脂和肾周脂中perilipin基因及脂肪代谢和糖皮质激素作用相关基因的表达。结果显示:两种氟烷基因型猪的体重、背膘厚和背膘指数无显著差异,但Halnn肾周脂重(P=0.09)和肾周脂指数(P=0.10)有低于HalNN猪的趋势。双因子方差分析结果表明Halnn猪脂肪组织中perilipin mRNA水平显著高于HalNN猪(P<0.05),而糖皮质激素受体基因...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 李青芝  陈叶雨  吴晓雲  刘亚  赖见生  李华  杨焕超  宋明江  龚全  林珏  
【目的】糖皮质激素受体(GR)参与了机体渗透调节、应激和免疫调节等多种生物学过程。因此,对GR表达特征的分析有利于揭示其在鱼类抗应激反应过程中的功能。【方法】以长江鲟转录组测序得到的Unigene序列作为基础,获得了GR的cDNA序列,同时研究了GR基因在各个组织及饥饿胁迫下的表达情况。【结果】GR基因开放阅读框为2316 bp,编码771个氨基酸,包含保守的锌指结构域和激素受体配体结合域,及鱼类特有的9-aa插入序列WRARQNMDG。GR在长江鲟各组织中广泛分布,其中,免疫器官脾脏、肝脏和鳃组织中表达量较高,在心脏和大脑组织中也有较高的表达水平。饥饿条件下,肝脏中GR相对表达量随饥饿时间的增加而逐渐上升,在饥饿7和14 d后,其表达量均显著高于对照组;肠道中GR在饥饿第7天表达量出现峰值,显著高于第0天(P<0.05)。复投喂后,肠道和肝脏中GR表达量恢复到了对照组水平。【结论】本研究表明GR参与了长江鲟对抗饥饿胁迫的应激反应过程。
[期刊] 水产学报  [作者] 陈凯  习丙文  滕涛  秦婷  潘良坤  谢骏  
为了解团头鲂糖皮质激素受体(GR)在应激反应中的调控机制,本研究以皮质醇注射模拟应激事件,采集组织样品,常规检测血糖、血清皮质醇水平;利用荧光定量PCR检测了gr在不同组织中的表达丰度及其参与调控的功能基因的表达变化;并通过常规石蜡切片开展了组织病理学研究。结果显示,gr1在脾脏、鳃、头肾等组织中有较高的表达量,gr2则在肝、垂体、肠等组织中具有较高的表达丰度。应激恢复过程中,下丘脑gr1表达量存在波动,gr2在0 h表达显著上调,gr1/gr2值逐渐增大;垂体中gr1和gr2均呈现先升后降的趋势,gr1/gr2值在2 h达到峰值水平;头肾中gr1表达量有波动,而gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点的表达量,gr1/gr2值逐渐减小;肝脏中gr1的表达量在0 h和2 h的表达量显著高于其他检测点,gr2表达有上下波动的现象,gr1/gr2值有减小的趋势,而pepck表达则出现了显著上调,在2 h达到峰值;皮肤中gr1先升高后降低,gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点,gr1/gr2值在2~8 h维持在较大值,而occ表达呈现先增加后降低的变化趋势;鳃中gr1与gr2均在2 h时发生了显著上调,gr1/gr2值在2~8 h维持在较大值,occ表达峰值出现在2 h。组织学研究显示鳃丝有增生现象,肾间组织中类淋巴细胞增多,其他所检视组织无明显病理改变。应激反应过程中gr在不同组织不同亚型间存在不同的表达变化,以及和不同组织器官中相关功能基因的相关性显示了GR在相关调控中的复杂性,而组织学研究结果则表明了应激反应存在诱发病理变化的风险。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 赵敏蝶   刘杰   赵茹茜  
[目的]本文旨在预测和筛选靶向调控鸡糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor, GR)表达的microRNAs。[方法]用TargetScan、PicTar和miRDB三种软件分别预测靶向鸡GR 3'UTR microRNAs并取交集;构建包含鸡GR 3'UTR的重组质粒及突变质粒,通过双荧光素酶实验鉴定microRNA和鸡GR 3'UTR的靶向性;用TargetScan和miRDB两种软件分别预测候选microRNAs的靶基因,用DAVID软件对预测出的共同靶基因进行GO功能分析;Western blot检测分别过表达候选microRNAs对鸡DF1细胞 GR蛋白表达的影响。[结果]miR124-3p、miR142-3p、miR204/211、miR183、miR18-5p和miR181a/181b是三种软件预测靶向GR 3'UTR的交集microRNA;双荧光素酶实验的结果表明miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合GR 3'UTR;两种软件预测三个候选microRNA的靶基因中都有GR且富集分子功能不同;在DF1细胞中过表达三个候选microRNA后,miR142-3p和miR204/211显著降低GR蛋白水平的表达(P < 0.05)。[结论] miR142-3p、miR204/211和miR18-5p靶向结合鸡GR 3'UTR且miR142-3p和miR204/21可以降低鸡DF1细胞中GR蛋白的表达水平。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张荣庆  李素珍  周光宏  邵彩梅  韩正康  
随日粮中添加 clenbuterol 剂量增加,经汽车长途运输后,肉鸭行为发生异常,死亡率明显提高;心率明显加快,心律不齐,T 波高耸;血清中皮质醇、皮质酮水平显著升高.剂量、心率、血清皮质酮三者呈高度正相关,提示高剂量 clenbuterol 增加了肉鸭对应激的敏感性.
[期刊] 中国农业科学  [作者] 孔雪  宋志刚  焦洪超  林海  
【目的】利用皮下注射人工合成糖皮质激素的方式模拟应激,通过核磁共振(NMR)技术研究应激及色氨酸对肉仔鸡下丘脑代谢状况的影响,为探明下丘脑食欲调控机制提供依据。【方法】10日龄AA肉仔鸡32只随机分为4组,早6:00禁食3h后,以2.0mg·kg-1BW剂量皮下注射地塞米松,同时灌注色氨酸(生理盐水溶解,500mg·kg-1BW),对照组分别皮下注射、灌服生理盐水,3h后取血浆及下丘脑。下丘脑用高氯酸萃取后进行核磁共振研究。【结果】通过1HNMR谱,发现应激改变了肉鸡下丘脑乳酸,葡萄糖,ATP,肌醇,3-羟基丁酸的相对含量;未检测到色氨酸信号的改变。【结论】NMR技术能够检测到应激状态下下丘脑...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 李云龙  杨章平  王小龙  常玲玲  冀德君  刘姗  甘宗辉  
【目的】探索中国南方荷斯坦奶牛SCD1基因不同基因型的差异表达及与牛奶中脂肪酸组成的相关性。【方法】以同一奶牛养殖场的303头中国荷斯坦奶牛为样本,利用PCR-SSCP技术检测SCD1基因第5外显子878 bp位置的多态性,采用定量FQ-PCR技术初步检测3种基因型的相对表达量,并运用气相色谱技术分析牛奶中脂肪酸的组成。【结果】共检测到3种基因型,即CC、CT和TT,基因型频率分别为0.617、0.339和0.044,等位基因C和T的频率分别为0.787和0.213,仅发现CT表达量显著高于TT(P<0.05)。CC、CT和TT在脂肪酸C4﹕0、C12﹕0、C17﹕0上存在显著差异(P<0.0...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 牛淑玲  张才  张国才  王哲  夏成  张嘉保  刘国文  陈玉江  
【目的】观察不同饲粮处理对奶牛产后泌乳量、血浆瘦素浓度和脂肪组织中leptin基因表达的影响。【方法】选用妊娠后期健康奶牛30头随机分为3组,每组10头。其中Ⅰ组为对照组,Ⅱ组和Ⅲ组为试验组;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组于产前28d开始分别饲喂中国奶牛饲养标准(2000)标准饲粮(能量摄入100%组)、标准增加20%饲粮(能量摄入120%组)和标准饲粮减少20%饲粮(能量摄入80%组);产后各组奶牛均饲喂同一标准饲粮,至56d结束。【结果】试验结果表明,Ⅲ组与Ⅰ组和Ⅱ组比较,不仅显著提高了产后奶牛产乳量,而且明显提高了产后奶牛血液leptin浓度,同时脂肪组织中leptin基因表达水平也增强。【结论】奶牛不...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 陈凯  习丙文  滕涛  王亚冰  高金伟  梁利国  谢骏  
促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin-releasing hormone receptor,crhr)是鱼类下丘脑–垂体–头肾调控轴上的重要应激调节因子。本研究通过c Dna末端快速扩增(race)技术成功克隆出团头鲂(megalobrama amblycephala)crhr1 m rna全长序列,应用生物信息学方法对其序列特征进行解析;同时采用荧光定量pcr技术分析了团头鲂crhr1的组织分布图谱及外源性皮质醇注射模拟应激处理下团头鲂crhr1 m rna的表达变化。研究结果表明,crhr1 m rna序列开放阅读框(open reaDing frame,orf)为12...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 占今舜  郭静  杨宏波  詹康  刘红  刘明美  赵国琦  
为研究不同精粗比全价颗粒饲料对犊牛不同组织中SREBP-1、FASN、SCD1和ApoA1mRNA表达的影响,选取日龄和体重相近的中国荷斯坦断奶公犊牛12头,分为4组,每组3头,各试验组精粗比分别为75∶25(Ⅰ)、70∶30(Ⅱ)、65∶35(Ⅲ)和60∶40(Ⅳ),预试期14d,正试期56d。结果表明,试验Ⅱ组肝脏、十二指肠和瘤胃中的SREBP-1和ApoA1mRNA相对表达量显著高于试验Ⅳ组(P<0.05),而在瘤胃和肌肉中的结果与之相反;试验Ⅰ组犊牛肝脏和十二指肠以及试验Ⅲ组瘤胃中的SCD1mRNA...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 迟良  李兰  潘庆杰  刘焕奇  
【目的】克隆乌骨鸡黑色素皮质激素受体-1(melanocortin 1-receptor,MC1R)基因,并对其进行生物学分析和原核表达。【方法】采集乌骨鸡的肌肉组织,提取其总RNA,根据GenBank上公布的原鸡(Gallus gullus)MC1R基因序列设计引物,利用反转录RT-PCR克隆乌骨鸡MC1R基因,对其进行生物学分析,并构建原核表达载体pET32a-MC1R,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。【结果】乌骨鸡MC1R序列由945个碱基组成,编码314个氨基酸。成功构建了重组质粒pET32a-MC1R的原核表达系统,并且体外诱导获得了MC1R蛋白。【结论】成功克隆了乌骨鸡MC...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 赵景鹏  姜克杰  董辉  
利用同位素双标法,测定在NO供体硝普钠(SNP)、NO合酶(NOS)抑制剂NG-硝基、L-精氨酸甲酯(L-NAME)和糖皮质激素皮质酮(corticosterone)存在条件下,基础状态或胰岛素诱导的肉鸡离体腓骨长肌的2-脱氧葡萄糖(2-DG)转运速率。结果表明:①SNP引起肌肉基础状态和胰岛素诱导的2-DG转运速率增加,表明NO是调节骨骼肌糖代谢的一个重要细胞因子。②皮质酮引起静态肌肉2-DG转运速率增加,可能与其破坏肌纤维膜的完整性有关。③皮质酮引起肌肉胰岛素诱导的2-DG转运速率下降,加入SNP后,胰岛素机能明显改善,表明应激早期,机体NO浓度的下降,可能与糖皮质激素诱发的胰岛素抵抗有一...
[期刊] 华北农学报  [作者] 霍文韬  周婷  余越  杨清澜  常馨丹  李键  熊显荣  熊燕  
旨在克隆牦牛诱导细胞凋亡DNA片段化45样效应因子A(CIDEA)基因序列、分析其生物学特性及检测CIDEA基因在牦牛不同组织及脂肪细胞分化中的表达模式。以金川牦牛皮下脂肪组织的cDNA为模板,采用PCR技术克隆CIDEA基因的CDS序列(Coding sequence),对CDS区进行相关的生物信息学分析;设计特异引物,检测该基因在金川牦牛肺脏、心脏、肾脏、脂肪等组织的表达情况;同时分离原代前体脂肪细胞,分析CIDEA基因在脂肪细胞分化过程中的表达趋势。结果表明,金川牦牛CIDEA基因的序列长度为696 bp,其中CDS序列为684 bp,编码227个氨基酸;金川牦牛CIDEA基因与普通牛的同源性最高,核苷酸序列同源性为94.14%,氨基酸序列同源性为99.54%,与鸡的同源性最低,核苷酸序列同源性仅为63.38%,氨基酸序列同源性仅为59.05%,利用MEGA 5.0软件构建进化树显示金川牦牛与牛的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。蛋白理化性质分析结果表明,CIDEA蛋白是一个不稳定的碱性亲水蛋白,不存在跨膜结构与信号肽;二级结构预测显示CIDEA蛋白中α螺旋占33.92%,无规则卷曲占51.98%。实时荧光定量PCR结果表明,CIDEA基因在金川牦牛脂肪组织中表达量最高,肺脏中表达量最低;在金川牦牛脂肪细胞分化过程中呈现上升的趋势。由此可推测金川牦牛CIDEA基因可能参与牦牛脂肪细胞分化与脂肪沉积。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 魏周文  孙超  姜东凤  侯增淼  刘春伟  
【目的】探讨二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠脂肪组织和肝脏生脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白-1c基因(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶基因(FAS),及脂解相关基因激素敏感脂酶基因(HSL)和甘油三酯水解酶(TGH)时序表达的影响。【方法】用不同浓度DHA(6.25和12.5 g/kg)灌胃小鼠,分别于0,1,2,4,8,16和24 h处死,取脂肪组织和肝脏,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂及脂解基因PPARγ、SREBP-1c、FAS,及脂解相关基因HSL和TGH的时序表达规律。【结果】脂肪组织中...
[期刊] 华北农学报  [作者] 王国富  吴慧光  孙国权  李俊雅  王景山  王玉泉  高树新  
为探讨二脂酰甘油酰基转移酶1和2基因(DGAT1和DGAT2)发育性表达特点及其与背膘厚的关系,采用137头肉用中国西门塔尔牛,屠宰并采集组织样品,根据胴体背膘厚度分成高、低2组,每组各选择15个个体,利用荧光定量PCR技术,对DGAT1和DGAT2基因在组织中的表达特征及其在不同个体背膘组织中的表达水平进行分析。研究发现,在睾丸、肾脏、肋间肉、心脏、胰脏、背膘、肩肉、肝脏、网脂、肠脂、脾脏、肺、眼肉和淋巴等多种组织中均有不同程度的表达,DGAT1和DGAT2在不同组之间的表达差异显著(P<0.05),且与背膘厚度呈显著相关(P<0.05)。结果表明,DGAT1和DGAT2与肉牛背膘厚度显著相...
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