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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安志兴 李向臣 王超 张涌
采用程序化冷冻方法 ,对不同植冰温度下几种冷冻液的结晶变化进行了分析 ,并比较了其对小鼠胚胎的冷冻效果。结果表明 ,- 5 .0℃植冰时 ,3种冷冻液 PEF、PGF和 PEGF只有部分结晶 ;当植冰温度为 - 5 .5℃时 ,PEF和 PEGF完全结晶时间为 1 0 min,PGF在 1 5 m in尚未完全结晶 ;- 6 .0℃植冰时 ,3种冷冻液完全结晶时间分别为 8,1 0和 1 0 min;- 6 .5℃植冰后完全结晶时间分别为 5 ,8和 5 min。将小鼠胚胎载入上述 3种冷冻液 ,- 5 .5℃植冰冷冻解冻后 ,囊胚孵化发育率分别为 81 .7% ,6 8.5 %和 87.5 ...
关键词：
植冰温度 结晶 胚胎冷冻 小鼠
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
剧世强 赵雪璠 张妍婷 孔妍 李建珅 芮荣
以小鼠卵丘细胞为供核细胞,猪体外成熟去核卵母细胞为受体,构建小鼠-猪种间体细胞核移植(iSCNT)胚胎,并以猪体细胞核移植(pSCNT)胚胎为对照,采用开放式拉长细管(OPS)法对所获iSCNT胚胎进行冷冻保存,研究不同冷冻保护液(ES、EFS和EDFS)及胚胎不同发育阶段(2-、4-、8-细胞)对冷冻效果的影响。结果显示:小鼠-猪iSCNT胚胎卵裂率与猪pSCNT胚胎相比无显著差异(P>0.05),但其8-细胞发育率则明显较低(28.1%对56.8%,P<0.05)。采用ES液作为冷冻保护液,iSCNT胚胎冻后存活率与EDFS组相似,但显著高于EFS组(28.6%和22.7%对9.5%,P<...
关键词：
种间核移植 胚胎 玻璃化冷冻
[期刊] 水产学报
[作者]
余来宁 危起伟 张繁荣 杨东 姚雁鸿 刘红艳
为了保存濒危鱼类中华鲟种质资源,对其囊胚细胞和原肠细胞进行了冷冻保存和核移植试验。用二甲亚砜(DMSO)、1,2-丙二醇(PG)、羟乙基淀粉(HES)3种抗冻剂,配制4种冷冻保护液:CP1(12%D)、CP2(10%P)、CP3(8%D+6%E)、CP4(7%P+6%E),冷冻细胞存活率分别为47.4%±4.7%、64.4%±3.6%、54.7%±4.7%、76.7%±5.7%,CP4保存效果最好,说明添加非渗透型抗冻剂羟乙基淀粉能提高冷冻保存细胞的存活率。比较了两种冷冻方法,发现细胞在-7℃平衡30min之后直接投入液氮的一步冷冻降温法是可行的。对不同发育时期的胚胎细胞冷冻存活率进行了比较,...
关键词：
中华鲟 胚胎细胞 冷冻保存 核移植
[期刊] 水产学报
[作者]
章龙珍 鲁大椿 柳凌 郭峰 张洁明
泥鳅胚胎 (胚孔封闭期 )用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温 (- 196℃ )冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周磊 罗渡 卢薛 王鹏飞 胥鹏 曾雷 李桂峰
实验所用翘嘴鳜(♀,Siniperca chuatsi)2~3龄,体质量1 000~1 500 g;斑鳜(♂,Siniperca scherzeri Steindachner)1~2龄,体质量300~500 g。于繁殖季节选取成熟度好的亲鱼以促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)和马来酸地欧酮(DOM)进行催产。通过筛选D-15、D-17、Ringer液和M-Hank’s液4种稀释液和二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)、乙二醇(EG)、1,2-丙二醇(PG)和二甲基甲酰胺(DMF)5种抗冻剂,发现DMSO和D-17分别是优选的抗冻剂和稀释液。以D-17作为斑鳜...
关键词：
斑鳜 精子 冷冻保存 杂交育种 种质资源
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李博宇 郭勇 倪和民 盛熙晖 陈余 王梁 王相国 肖龙菲 邢凯 齐晓龙
旨在研究不同抗冻保护剂对鸡精液的冷冻保存效果,并通过比较差异表达基因,以解释不同保护剂的抗冻机制。以海兰褐种公鸡为研究对象,检测了不同抗冻保护剂(保护剂Ⅰ和保护剂Ⅱ)冷冻保存后的精子活性,并利用Affymetrix表达谱芯片检测技术,对差异表达相关基因进行筛选。结果表明:1)保护剂Ⅰ组的精液冻后活力活率(27.05±1.22vs 47.65±5.89)显著高于保护剂Ⅱ组(20.65±1.50vs 35.15±5.15)(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵学明 杜卫华 王栋 郝海生 朱化彬
【目的】探讨冷冻保存对牛体外生产胚胎能量代谢、有氧代谢造成的影响。【方法】采用常规法或玻璃化法(open pulled straw,OPS法)冷冻保存牛体外受精(in vitro fertilization,IVF)囊胚和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II和GENMED ROSAssay Kit检测了冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。【结果】(1)IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率((93.25±5.17)%和(77.56±3.52)%)均显著高于...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
田永胜 刘本伟 陈松林
为避免鱼类胚胎玻璃化冷冻过程中脱玻璃化现象发生,本文对冷冻过程中温度变化及解冻方法进行了研究。在室温13℃下,将含有玻璃化液FVS3的麦管直接投入到-196℃的液氮中,麦管内温度达到-196℃时,所用的时间为15.46±1.38s,降温速率为800℃/min。对玻璃化麦管在35~45℃水浴中解冻时间进行测定。结果显示,解冻所需时间在6.17~7.94s之间,麦管从-196℃升高到13℃的解冻速率为1500~2000℃/min。当水浴温度从37℃逐步升高到72℃时,对水浴表面蒸气温度的变化进行了测定,相应水温下蒸气温度从25.47℃升高到38.6℃。在麦管中加入不同浓度的玻璃化液FVS1、FVS...
[期刊] 水产学报
[作者]
黄晓荣 庄平 章龙珍 冯广朋 刘鉴毅 张涛 赵峰 侯俊利
为了解超低温冷冻对胚胎形态结构的影响,以中华绒螯蟹为研究对象,运用石蜡切片、扫描电镜和透射电镜观察细胞分裂期、原肠期和原溞状幼体期胚胎,分别用玻璃化液处理和经超低温冷冻后外部形态和内部结构的变化。结果发现:(1)显微观察表明,细胞分裂期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后吸水膨胀明显,三步平衡后胚胎形态无明显变化,超低温冷冻后,卵黄物质从细胞中溢出,细胞破损严重;原肠期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后,外部形态与鲜胚无明显差异,经过冷冻后,所有胚胎内部变成粉红色,胚体由原来的透明变成不透明状,细胞膜边缘模糊似绒毛状;(2)扫描电镜观察,玻璃化液处理后的所有原肠期胚胎表面褶皱呈沟壑状,形成一层网...
关键词：
中华绒螯蟹 胚胎 形态结构 超低温冷冻
[期刊] 淡水渔业
[作者]
柳凌 刘宪亭 章龙珍 鲁大椿
[期刊] 水产学报
[作者]
田永胜 陈松林 于过才 季相山
大菱鲆隶属于鲆科(Bothidae)、菱鲆属(Scophthalmus), 自然分布于大西洋东侧欧洲沿岸以及黑海和地中海沿岸, 是欧洲的重要养殖鱼类之一,1992年黄海水产研究所自英国引进这一鱼种,目前已在我国山东、辽宁、福建等沿海地区推广养殖,成为我国工厂化海水养殖的名贵鱼种之一。对于这一引进的新鱼种,在其胚胎和仔稚幼鱼的发育,体表色素细胞形态,卵膜对DMSO的渗透性等生物学方面进行了一定的研究,而做为一个新的鱼种资源,对其种质资源的保存研究,目前国内还未有报道。冷冻保存是长期保存鱼类种质资源和遗传多样性的有效手段,但鱼类胚胎由于体积大(直径为1-6 mm),膜通透
关键词：
大菱鲆 胚胎 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄晓荣 庄平 章龙珍 冯广朋 刘鉴毅 张涛 赵峰
研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻4...
关键词：
中华绒螯蟹 胚胎 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 水产学报
[作者]
陈松林
The current status and importance of preserving fish germplasm resources were described. The basic principle of cryobiology and its application potentials in preservation of aquatic germplasm resources were examined. The mechanism of cryodamage was discussed. The recent advances and major problems ...
关键词：
鱼类 配子 胚胎 冷冻保存
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
王春花 陈松林 田永胜 刘本伟 邓寒
以牙鲆胚胎为材料,对胚胎程序化冷冻保存的主要环节进行了探讨,以优化牙鲆胚胎的程序化超低温冷冻保存法。单一抗冻剂的毒性试验表明甲醇(Methanol)、1,2-丙二醇(PG)的毒性低于其他抗冻剂的毒性。混合抗冻剂的毒性试验表明,20%~25%PM抗冻剂的毒性很低,经其平衡处理的胚胎,冷冻至-30℃,成活率可达80%以上。植冰前采用2℃/min的降温速率,从植冰后到入液氮前温度采用8℃/min的降温速率效果较好。入液氮前温度的筛选实验表明,入液氮前的温度以-45℃较好。利用20%PM和22%PMP,采取优化的降温程序冷冻保存尾芽期的牙鲆胚胎,分别获得5枚和7枚复活胚胎,并全部孵化出膜。
关键词：
牙鲆 胚胎 程序化 冷冻保存
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
于过才 陈松林 孔晓瑜 田永胜 季相山
对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻液A1 、A2 、B1 、B2 中的平衡处理时间 ,为进行鲈鱼胚胎冻前平衡提供了参考时间。比较了植冰和不植冰对鲈鱼胚胎冷冻保存结果的影响及不同洗脱方法洗脱胚胎的效果。结果表明 ,在冷冻过程中诱导植冰的胚胎成活率高于未植冰组 ,两步法洗脱效果优于一步法和三步法。用不同降温速率进行了鲈鱼胚胎的超低温冷冻保存实验 ,结果表明 ,采用 1 .5℃ /min的降...
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鲈鱼 胚胎 程序冷冻
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