【目的】比较不同日龄湖羊Ovis aries羔羊瘤胃上皮细菌多样性及菌群组成差异，为幼龄反刍动物早期断奶提供理论依据。【方法】选用10只出生体质量相近的初生湖羊羔羊，分别于日龄30 d (D30)和45 d (D45)各屠宰5只以获得瘤胃上皮组织，对其进行测序及微生物多样性分析。【结果】D45组羔羊瘤胃上皮细菌的操作分类单元(OTU)个数显著多于D30组羔羊(P<0.05)，拟杆菌属、琥珀酸菌属、瘤胃球菌属Ruminococcus和奇异菌属Atopobium与瘤胃乳头长度呈负相关(P<0.01)，琥珀酸菌属与瘤胃乳头宽度呈正相关(P<0.01)。【结论】不同日龄羔羊的瘤胃上皮细菌定植存在差异，这些菌群参与瘤胃挥发性脂肪酸代谢及瘤胃乳头发育。图7表2参32

[目的]本试验旨在研究低蛋白日粮添加不同水平尿素对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响。[方法]70只育肥公湖羊(23.6～26.0 kg)随机分为5组，分别饲喂以下日粮：正常豆粕(SBM,170 g·kg~(-1)),低豆粕(40 g·kg~(-1))基础上添加0、10、20和30 g·kg~(-1)尿素(U0、U10、U20、U30)。试验预饲期1周，正试期8周。采集瘤胃液测定发酵参数和功能菌群数量，同时扩增细菌16S rRNA基因V3—V4区进行Illumina-MiSeq测序。[结果]与U10组相比，U20和U30组瘤胃液pH值显著升高(P<0.05)。氨态氮(NH_3-N)浓度随尿素添加量的增加显著升高(P<0.05)。与U0和U30组相比，SBM、U10和U20组总菌、甲烷菌和原虫数量显著升高(P<0.05)。Illumina-MiSeq测序结果显示U30组Shannon指数显著高于U0和U10组(P0.05)。U10组Bacteroidetes的丰度显著高于SBM、U20和U30组(P<0.05),但Firmicutes却显著降低(P<0.05)。RDA结果显示pH值、NH_3-N和总挥发性脂肪酸(TVFA)对瘤胃不同菌属的影响程度存在差异，其中pH值的影响最显著(P

[目的]本试验旨在研究低蛋白日粮添加不同水平尿素对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响。[方法]70只育肥公湖羊（24.3±1.7 kg）随机分为5组，分别饲喂以下日粮：标准豆粕[SBM， 170 g·kg~(-1)干物质（DM）]，低豆粕（40 g·kg~(-1) DM）基础上添加0、10、20和30 g·kg~(-1)尿素（U0、U10、U20、U30）。试验预饲1周，正试8周。采集瘤胃液测定发酵参数和功能菌群数量，同时扩增细菌16S rRNA基因V3-V4区进行Illumina-Miseq测序。[结果]与U10组相比，U20和U30组瘤胃液pH显著升高（P<0.05）。氨态氮（NH_(3)-N）浓度随尿素添加量的增加显著升高（P<0.01）。与U0和U30组相比，SBM、U10和U20组总菌、甲烷菌和原虫数量显著升高（P<0.05）。Illumina-MiSeq测序结果显示U30组Shannon指数显著高于U0和U10组（P0.05）。U10组Bacteroidetes的丰度显著高于SBM、U20和U30组（P<0.05），但Firmicutes却显著降低（P

该试验旨在研究饲粮粗饲料来源对湖羊羔羊盲肠内容物菌群结构和功能的影响。选用7日龄（3.77±0.46）kg湖羊公羔60只，随机将试验湖羊公羔分为4个处理组，每组15只羔羊，饲草来源组饲喂苜蓿干草（Alfalfa hay，AH）和燕麦干草（Oat hay，OH），非饲草来源组饲喂甜菜粕（Beet pulp，BP）和大豆皮（Soybean Hulls，SH）。试验中羔羊自由采食及饮水。70日龄羔羊饲养试验结束，各组随机将6只羔羊屠宰，获得24个盲肠内容物样品以备16S rDNA测序。结果表明：24个盲肠内容物样品共获得72482条有效数据与2999个OTU，鉴定获得12个门，54个纲，103个目，174个科和349个属；在Observed species指数、Simpson指数、Shannon指数方面，OH组显著高于AH组（P < 0.05）；盲肠以厚壁菌门和拟杆菌门为核心菌门；瘤胃球菌科为优势菌科；OH组毛螺旋菌科显著高于AH和SH组、克里斯滕森菌科显著高于AH组和BP组（P < 0.05）；BP组变形菌门显著高于AH、SH和OH组（P < 0.05），BP组毛螺旋菌科极显著高于AH和SH组（P < 0.01）；OH 组Anaerostipes菌属显著高于AH组；SH和OH组未鉴定的丹毒丝菌属显著高于AH和BP组。使用Tax4Fun法的预测分析得出湖羔羊盲肠菌群以碳水化合物代谢、脂类、能量和氨基酸代谢为主。相关性分析Muribaculaceae菌科与活体重和日增重之间呈正相关关系，普雷沃氏菌科与活体重和日增重之间呈负相关关系（P < 0.05）。综上所述，开食料不同粗饲料来源由于其纤维素结构不同，对湖羊羔羊盲肠微生物菌群结构及功能作用上具有较大差异。

【背景】羊大肠杆菌病是一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病,是规模化羊场最为常见高发的细菌性疾病之一,尤其是初生羔羊易被产肠毒素大肠杆菌(ETEC)感染,引起羔羊腹泻,又叫羔羊白痢,使养殖场遭受严重的经济损失。而传统的抗生素治疗方案存在诸多缺陷。【目的】本研究通过让湖羊羔羊口服大肠杆菌F17菌株获得不腹泻和腹泻的羔羊个体,筛选出服用大肠杆菌F17菌毛后不腹泻与腹泻型个体中差异表达的circRNA,进而探究circRNA在绵羊抗腹泻中的作用,从而发现与抗大肠杆菌病性状相关的候选基因。从circRNA层面上,加深对绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的认识,确定绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的功能基因。【方法】用CIRI软件从头预测circRNA,利用RNA-seq技术,首次筛选出感染大肠杆菌F17菌株后不腹泻与腹泻型羔羊个体脾脏中差异表达的(DE)circRNA,对差异表达转录本进行GO富集分析,结合GO注释结果对其功能进行描述。统计每个GO条目中所包括的差异转录本个数,并用Fisher’s exact test计算每个GO条目中差异转录本富集的显著性。然后随机选择6个DE circRNA,利用q-PCR分别验证这6个DE circRNA在不腹泻和腹泻组羔羊脾脏内的相对表达水平,进而利用Miranda软件来预测与miRNA结合的circRNA以及miRNA的靶基因,根据miRNA靶基因的功能注释来阐明此部分circRNA的功能,分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,最后用q-PCR验证circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平。【结果】绘制参考序列后,鉴定出已知的7 730个circRNA,DE circRNA与GO数据库进行比对,发现一共有60条circRNA被注释和分类到297个功能亚类中。利用RNA-seq在不腹泻和腹泻羔羊脾脏中筛选出60个差异表达的(DE) circRNA,其中31个上调和29个下调,用q-PCR验证随机选择的6个DE circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。利用Miranda分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,发现6个circRNA、5个miRNA和8个mRNA之间存在一定的靶标关系,用q-PCR验证mRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。【结论】探究了对于不腹泻和腹泻羔羊脾脏中circRNA的表达谱,进一步了解其在绵羊抗病发生过程中的调控作用。发现了不腹泻和腹泻羔羊脾脏中差异表达的circRNA,有助于找出羔羊如何抵抗腹泻的发生机制,为羔羊抵抗腹泻提供科学的依据。

研究不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃液细菌多样性及群落结构的影响。选择24只健康的8月龄、体重约25kg的内蒙古绒山羊母羊,随机分为4组,每组6只,分别为苜蓿组(G1)、苜蓿补饲精料组(G2)、玉米秸秆组(G3)和玉米秸秆补饲精料组(G4),试验期共25d,其中预饲期20d。在正式试验期第5天,经口腔采集瘤胃液,利用高通量测序技术进行瘤胃细菌多样性分析。结果表明:基于相似性>97%的原则,4组样品共产生1 399个操作分类单元(OTU),共享OTU 1 040个,约占总数的74.34%;各组α多样性指数指标无显著性差异(P>0.05)。各组门水平最优势菌为拟杆菌门,科水平最优势菌为普雷沃氏菌科,属水平最优势菌为普雷沃氏菌属,在所有占总细菌比例大于1%的瘤胃细菌中,G2组软壁菌门比例显著高于G3和G4组(P<0.05),G1组毛螺旋菌科比例显著(P0.05)。综合得出,不同饲粮类型条件下,内蒙古绒山羊最优势菌门为拟杆菌门,最优势菌科是普雷沃氏菌科,最优势菌属是普雷沃氏菌属;不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃菌群结构影响不明显。

【目的】探讨代乳粉中添加甘露寡糖(mannan oligosaccharides,MOS)对7—28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育的影响。【方法】选择同质性良好的7日龄湖羊公羔(双羔)30只,随机分为2组,每组15只,每只为1个重复,对照组羔羊饲喂不含MOS的代乳粉,试验组羔羊饲喂含0.2%MOS的代乳粉,试验期21d。羔羊28日龄时,两个试验组各随机选择8只羔羊屠宰,取出消化道,称量各胃室和肠段包含内容物的质量和净质量,量取各肠段长度,用以计算各部位的相对质量和内容物分布,以及各肠段的相对长度。多聚甲醛固定皱胃胃底腺区及十二指肠、空肠和回肠中段的组织样品,测定组织形态和小肠上皮细胞凋亡率。采集十二指肠、空肠和回肠的黏膜样品,测定紧密连接蛋白1 (claudin 1)、闭锁小带1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭锁蛋白(occludin)的mRNA表达量。【结果】除空肠相对长度外(%全肠长度,P=0.040),MOS对羔羊胃肠指数(%活体质量)、胃肠相对质量(%全胃质量、%全肠质量和%全胃肠质量)、肠道相对长度(%全肠长度)、内容物相对活体质量(%活体质量)、胃肠内容物相对总胃/肠内容物及总胃肠内容物相对质量(%总胃内容物、总肠内容物、总胃肠内容物)、小肠上皮细胞凋亡率和小肠黏膜claudin 1蛋白mRNA的表达量均没有产生显著影响(P>0.05),但MOS显著提高羔羊十二指肠绒毛高度和肌层厚度并显著降低绒毛宽度(P=0.033,P=0.047,P=0.015),显著上调空肠ZO-1蛋白mRNA表达量(P=0.028),此外,MOS有提高羔羊回肠绒毛高度、绒毛宽度和隐窝深度、皱胃肌层厚度及回肠occludin蛋白mRNA表达量的趋势(P=0.075,P=0.078,P=0.085,P=0.084,P=0.052)。【结论】MOS对7—28日龄湖羊羔羊胃肠道相对质量、长度和内容物分布基本无显著影响,但可改善十二指肠和回肠绒毛及肌层的组织形态,维持小肠屏障功能,有利于提高养分消化率。

【目的】观察代乳粉中添加单宁酸对7—28日龄湖羊羔羊胃肠道生长发育的影响。【方法】选择同质性好的7日龄湖羊公羔(双羔)30只,随机分为2组,每组15只,每只1个重复,分别饲喂对照代乳粉或单宁酸含量为0.2%的代乳粉,试验期21 d。羔羊28日龄时饲养试验结束,每组随机选择8只羔羊进行屠宰,分离胃室和肠段,分别称量各胃室和各肠段净质量以及含内容物质量,并量取各肠段的长度,计算各胃室和各肠段的相对质量和相对长度及内容物分布。肠道组织形态学和上皮细胞凋亡率用皱胃胃底腺区及十二指肠、空肠和回肠中段的组织样品测定。肠道屏障功能相关的闭锁蛋白(occludin)、闭锁小带1(zonula occludens-1,ZO-1)和紧密连接蛋白1(claudin 1)mRNA表达量用采集的十二指肠、空肠和回肠黏膜测定。【结果】除十二指肠指数(%活体质量,P=0.012)和相对质量(%全肠质量,P=0.034;%全胃肠质量,P=0.017)、空肠和结肠相对长度(%全肠长度,P=0.030,P=0.004)及结肠内容物分布(%活体质量,P=0.039)外,单宁酸对羔羊胃肠指数(%活体质量)、胃肠相对质量(%全胃质量、%全肠质量和%全胃肠质量)、肠道相对长度(%全肠长度)、内容物相对质量(%活体质量)、胃肠内容物相对总胃/肠内容物及总胃肠内容物相对质量(%总胃内容物、总肠内容物、总胃肠内容物)以及小肠claudin 1蛋白mRNA表达量均没有产生显著影响(P>0.05),但显著提高羔羊十二指肠肌层厚度并降低绒毛宽度(P=0.013,P=0.001),显著上调空肠ZO-1蛋白mRNA表达量(P=0.003),此外,单宁酸有上调羔羊空肠occludin蛋白mRNA表达量并降低空肠绒毛宽度和隐窝深度以及空肠和回肠上皮细胞凋亡率的趋势(P=0.077,P=0.073,P=0.062,P=0.097,P=0.052)。【结论】单宁酸显著降低7—28日龄湖羊羔羊十二指肠相对质量和空肠相对长度,但可通过提高十二指肠肌层厚度、上调空肠ZO-1蛋白和occludin蛋白mRNA表达量并降低空肠隐窝深度及空肠和回肠上皮细胞凋亡率来改善肠屏障功能。

【目的】利用16S rDNA高通量测序技术和LC-MS/MS非靶向代谢组学技术,研究短期和长期饲喂添加枯草芽孢杆菌日粮对育肥湖羊瘤胃内容物菌群和血清代谢物的影响。【方法】选择日龄((60±10) d)相近、体质量((19.51±2.07) kg/头)接近的湖羊断奶公羔36只,随机分为3组,分别为对照组(CON)、枯草芽孢杆菌Ⅰ组(BSN)和枯草芽孢杆菌Ⅱ组(BSH),每组12只羊。CON组饲喂基础饲粮,BSN组饲喂基础饲粮+100 mg/kg枯草芽孢杆菌,BSH组饲喂基础饲粮+200 mg/kg枯草芽孢杆菌。预试期10 d,正试期60 d,分别在正试期的第30天(短期)和第60天(长期)每组随机选择6只羊取瘤胃内容物和血清进行分析。【结果】(1)短期和长期饲喂添加枯草芽孢杆菌饲粮对湖羊瘤胃微生物丰富度指数Chao 1指数和多样性指数Shannon指数、Simpson指数均无显著影响(P>0.05)。湖羊瘤胃菌群在门水平上,短期饲喂BSN组的螺旋体菌门、迷踪菌门相对丰度较CON组显著降低(P <0.05),长期饲喂BSH组的变形菌门相对丰度显著升高(P<0.05);在属水平上,短期饲喂BSN组普雷沃氏菌属UCG-003相对丰度显著降低(P<0.05),而瘤胃球菌属1相对丰度显著升高(P<0.05)。长期饲喂BSN和BSH组湖羊普雷沃氏菌属UCG-003相对丰度显著降低(P<0.05)。(2)短期饲喂BSN和BSH组湖羊血清代谢物中L-苹果酸、D-2,3-二羟基丙酸、5-氨基水杨酸、2-氮杂环丁烷羧酸、棕榈酰溶血磷脂酸、1-磷酸果糖、核黄素均较CON组显著降低(P<0.05);BSN组5-磷酸脱氧核糖、丙烯酸、甘氨酰异亮氨酸、2-酮丁酸、1,2,4-偏苯三酚、β-D-半乳糖、丁酸乙酯均较CON组显著降低(P<0.05),而3'-磷酸腺苷较CON组显著升高(P<0.05),差异代谢物相关通路为辅因子的生物合成、核黄素代谢、磷酸转移酶系统等。长期饲喂BSH组10E,12Z-共轭亚油酸、N4-乙酰胞嘧啶、吡咯烷酮羧酸、9,10-环氧十八烷酸、肌酸酐均较CON和BSN组显著升高(P<0.05),差异代谢物相关性最高的关键通路为程序性坏死、鞘脂信号通路和鞘脂代谢。(3)属水平上差异微生物和差异代谢物相关性分析发现,普雷沃氏菌属UCG-003与大豆苷显著负相关(P<0.05),螺旋菌属2与3'-磷酸腺苷显著负相关(P<0.05),而瘤胃球菌属UCG-011与对苯二甲酸、喹啉酸、5,7-二羟基-2-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-4H-色胺-4-酮显著正相关(P<0.05)。【结论】枯草芽孢杆菌短期饲喂可调节湖羊瘤胃微生态平衡,使纤维降解有关的细菌相对丰度增加,但长期饲喂不仅调节能力降低,且长期大剂量(200 mg/kg饲粮)饲喂还会引起瘤胃微生物菌群失调;同时,枯草芽孢杆菌可影响湖羊代谢过程,短期饲喂可能调控辅因子的生物合成、核黄素代谢、磷酸转移酶系统等代谢过程,长期饲喂可能调控程序性坏死、鞘脂信号通路和鞘脂代谢。

[目的]本试验旨在研究不同硒源和硒水平对育成期湖羊母羊生长性能、组织硒含量和瘤胃发酵的影响。[方法]选取48只6月龄、平均体质量(27.95±0.27)kg湖羊母羊,随机分为4组,每组2个重复,每个重复6只(分栏饲喂),分别饲喂不同硒源和硒水平的全混合(TMR)日粮。对照组(C组)饲喂基础日粮,试验组日粮中分别添加0.5 mg·kg(-1)酵母硒(0.5 SY组)、0.3 mg·kg(-1)酵母硒(0.3 SY组)和0.3 mg·kg(-1)亚硒酸钠(0.3 SS组),试验期70 d。[结果]与C组相比,

[目的]本试验旨在研究湖羊开食料中不同中性洗涤纤维(NDF)水平及补饲起始时间对羔羊生长发育的影响，以优化羔羊补饲方案。[方法]选择98只相同日龄、初生体重接近(约3.29 kg)的湖羊羔羊，随机分成7组(n=14):3个试验组从14日龄开始补饲至60日龄，开食料中NDF水平分别为15%、20%、25%(质量分数);3个试验组从21日龄开始补饲至60日龄，开食料中NDF水平分别为15%、20%、25%;对照组不补饲开食料。分别测定羔羊0、30、60日龄体重，计算平均日增重；测定60日龄屠宰胴体质量、内脏器官质量、复胃容积、4个胃室(瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃)的质量，计算屠宰率和脏器指数。[结果]自14和21日龄起补饲NDF水平分别为15%、20%、25%的开食料对湖羊羔羊平均日增重、宰前活重(60日龄体重)等具有极显著促进作用(P<0.01),其中14日龄开始补饲20%NDF的开食料对体重增长的促进效果最佳。湖羊羔羊自14和21日龄起补饲含15%、20%、25%NDF的开食料，对肝、肾、胃等脏器的发育具有显著促进作用(P0.05)。[结论]14日龄开始补饲含有20%NDF的开食料最有利于湖羊羔羊生长发育，尤其对肝脏、肾脏、瘤胃和瓣胃的发育具有显著促进作用。

【目的】通过筛选对大肠杆菌(E.coli)F17菌毛非腹泻型与腹泻型的绵羊脾脏中差异表达的lncRNA,来探究lncRNA对绵羊抗腹泻的作用。【方法】本研究通过对湖羊羔羊口服E.coli F17菌株获得非腹泻和腹泻型个体,利用羔羊肠道细菌计数、病理组织切片验证攻毒成功性;构建非腹泻组和腹泻组羔羊脾脏的cDNA文库,使用Illumina HiSeq 2500平台进行配对测序;通过Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析对差异表达转录本功能描述和细胞通路分析,利用FPKM法估计lncRNA和mRNA转录物的表达水平,并用高通量测序技术RNA-seq筛选出非腹泻和腹泻个体脾脏中的差异表达lncRNA;然后利用荧光定量PCR技术检测了非腹泻组和腹泻组羔羊脾脏组织中DE lncRNA和DE mRNA的表达水平,来验证筛选的DE lncRNA在非腹泻组过程中发挥作用。【结果】羔羊口服E.coli F17菌株后,出现非腹泻和腹泻两种表型,腹泻组羔羊肠道中的细菌数量显著高于非腹泻组(P

本试验旨在分析湖羊羔羊采食两种不同中性洗涤纤维(neutral detergent fiber, NDF)来源开食料时生长性能和养分消化代谢的差异。采用对照试验设计,选择28只初生重相似(3.5±0.7 kg)的湖羊公羔,0～2日龄吮食母乳,3日龄羔羊与母羊分离,并开始饲喂代乳粉至28日龄断奶,7日龄(补饲前)按同质性原则将试验羔羊分为两个处理组,每个处理组14只,分别饲喂以苜蓿干草(alfalfa hay, AH)和甜菜粕(beet pulp, BP)为主要NDF来源的全混合饲粮。羔羊54日龄至60日龄进行消化代谢试验,70日龄时结束试验。结果表明,7～28日龄时AH组羔羊平均日增重以及养分和代谢能采食量均显著高于BP组(P 0.05)。AH组羔羊对开食料干物质(dry matter, DM)、NDF和酸性洗涤纤维(acid detergent fiber, ADF)的表观消化率显著低于BP组(P <0.05)。表明本试验条件下,以苜蓿干草为NDF来源开食料能显著提高湖羊羔羊断奶前的生产性能及采食量,而以甜菜粕为NDF来源开食料能显著提高湖羊羔羊断奶后DM、NDF和ADF表观消化率。

在喂青杂干草条件下,湖羊瘤胃食糜 pH 和总缓冲容量分别为6.52±0.06和162.52±0.35 mmol/L;盲肠食糜则分别为8.02±0.06和244.33±7.70 mmol/L。通过灌注乙酸溶液于瘤胃或盲肠会影响其 pH 和总缓冲容量,提示瘤胃与盲肠代谢存在协调性联系。

为探讨麦秸作为粗饲料的可行性,以苜蓿作为对照,通过对湖羊的饲喂试验分析麦秸对瘤胃发酵代谢及肠道组织形态的影响,测定湖羊的消化道内容物pH及重量、血液及瘤胃液脂多糖含量、瘤胃液酶活力、挥发性脂肪酸含量及脏器指数,并观察肠道组织形态。结果表明:1)与苜蓿干草组相比,麦秸组瘤胃pH显著降低(P<0.05),网胃、瓣胃、皱胃及肠道pH无显著差异;2)与苜蓿干草组相比,麦秸组瘤胃内容物重及占宰前活重比例极显著升高(P<0.01);3)两组湖羊瘤胃内容物和血液中脂多糖浓度均无显著性差异;4)麦秸组瘤胃内容物中木聚糖酶活力显著高于苜蓿干草组(P<0.01);5)两组湖羊瘤胃中挥发性脂肪酸含量无显著差异;6)两组湖羊脏器指数无显著差异;7)两组湖羊十二指肠、空肠和盲肠组织形态无病理性变化。综上,与苜蓿相比,饲喂麦秸在一定程度上减缓了湖羊瘤胃排空速率,显著提高瘤胃木聚糖酶活力,促进纤维水解;饲喂苜蓿或麦秸均不会改变湖羊瘤胃发酵类型,不会影响瘤胃代谢及肠道组织形态,为麦秸在反刍动物上的合理利用提供了基础数据。