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[期刊] 中国农业科学  [作者] 杜曼婷  李欣  李铮  高星  张彩霞  张德权  
【目的】钙蛋白酶是宰后肌肉嫩化过程的主要贡献者,通过蛋白水解能力发挥其功能作用。钙蛋白酶,尤其是μ-钙蛋白酶(μ-calpain)的活性与宰后肌肉的嫩度密切相关。探究不同嫩度的羊肉中钙蛋白酶的差异,确定羊宰后肌肉中μ-钙蛋白酶的主要作用时间及其与嫩度的关系,为调控钙蛋白酶酶活进而调控嫩度提供理论基础。【方法】选取乌珠穆沁大尾羊背最长肌为样品,通过测定肌原纤维小片化指数将样品进行高、低嫩度分组,分别测定嫩度差异样品在宰后成熟过程中p H、μ-钙蛋白酶大亚基存在状态,以及未自溶μ-/m-钙蛋白酶的含量随宰后时间的变化情况。【结果】高、低嫩度组宰后p H的变化规律一致,宰后各时间点两组样品p H均差...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 刘安芳  朱庆  刘益平  张增荣  
【目的】了解鸡钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因的组织特异性表达情况和在不同鸡品种间的表达差异。【方法】利用半定量RT-PCR方法研究CAST基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。【结果】CAST基因表达于鸡的各个不同组织中,在胸肌中的表达量最多并显著高于其它组织(P<0.05);不同鸡品种胸肌组织中CAST基因表达量差异显著(P<0.05),艾维茵肉鸡胸肌组织中CAST基因的表达量显著高于其它几个品种(P0.05),但显著高于蛋鸡(P<0.05)。【结论】结果表明钙蛋白酶抑制蛋白是一种在鸡体内普遍存在的蛋白,CAST基因在鸡不同...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 马美湖  唐晓峰  
为探明牛肉嫩化的有效方法 ,对宰后牛的股二头肌注射 Ca Cl2 和木瓜蛋白酶进行嫩化处理 ,并于后熟 2 4h左右测定了肌原纤维小片化指数 (MFI)、粗钙激活因子 (CAF)活性和可溶性胶原蛋白含量等指标 .结果表明 :宰后注射 Ca Cl2 和木瓜蛋白酶 ,显著降低了股二头肌的剪切力 .注射 3% Ca Cl2 处理的 CAF活性比对照组显著增强 .试样的可溶性胶原蛋白含量与剪切力显著相关 (r=- 0 .96 0 ) ,对照组 MF I与相应的剪切力相关显著 (r=- 0 .736 ) .由此认为 ,MFI和 CAF活性可作为衡量常规方法处理后熟或注射 Ca Cl2 牛肉嫩度的指标 ,...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈琳  周光宏  徐幸莲  张万刚  
【目的】研究高氧气调包装(Hi Ox,80%O2/20%CO2)对宰后猪肉蛋白质氧化、钙蛋白酶活性及蛋白质降解的影响,探讨高氧气调包装影响猪肉品质的内在机制。【方法】选取12条冷却(4℃)24 H后的杜洛克×长白×约克夏三元杂交猪背最长肌,分别进行高氧气调包装和真空包装(VP),4℃冷库贮藏,分别在1、4、6 d测定羰基含量及分布、巯基含量、肌节变化、钙蛋白酶活性、肌联蛋白及肌钙蛋白-T降解变化。【结果】高氧气调包装组羰基含量高于真空包装组且贮藏第4和6天差异显著(P<0.05)。贮藏第1和4天,高氧气调包装组肌细胞外围出现羰基氧化荧光信号,荧光以靠近细胞膜处密度更高,并且逐渐向细胞内部扩散;...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 朱威霖  吕丽红  陈秀荔  彭敏  赵永贞  杨春玲  蒋伟明  邵鹏威  陈晓汉  
通过克隆凡纳滨对虾钙蛋白酶B(Calpains,Calp-B)、钙蛋白酶D(Calpains,Calp-D)、钙蛋白酶M(Calpains,Calp-M)基因序列,并对其进行生物性息学预测和分析。根据同源比对设计引物,以凡纳滨对虾肌肉组织的C Dna为模板pCR扩增目的基因,克隆测序和拼接。结果:首次获得凡纳滨对虾的Calp-M和Calp-D基因序列,Calp-M、Calp-B和Calp-D3个基因的部分C Dna序列长度分别为597、1739、623 Bp,分别含有507、924、232 Bp的开放阅读框(ORF),分别编码169、307和77个氨基酸的蛋白前体,分子量为19.350、35....
[期刊] 中国农业科学  [作者] 黄明  黄峰  黄继超  徐宝才  周光宏  徐幸莲  
肌肉的宰后嫩化机制一直是国内外肉品科学研究的一个热点,目前认为肌肉宰后嫩度的改善主要归因于内源性水解酶作用所引起的肌原纤维蛋白的有限降解。钙激活酶虽然是宰后嫩度改善的一个主要贡献者,但不是惟一的,而是多种内源酶类协同作用的结果。本文综述了溶酶体组织蛋白酶、蛋白酶体、钙激活酶在宰后嫩化过程的作用;介绍了细胞凋亡的特点、通路及凋亡酶,并对细胞凋亡酶对宰后嫩度改善的潜在贡献进行了讨论;最后分析了细胞凋亡酶和钙激活酶在宰后成熟过程中的交互作用及共同贡献于肌肉宰后嫩化的可能性。
[期刊] 水产学报  [作者] 夏松养  谢超  霍建聪  邓尚贵  
以低值鱼蛋白为原料通过复合酶水解法和钙修饰法获得了蛋白质酶水解物的修饰产物并对其功能活性进行了初步研究。结果表明,未脱脂的鱼蛋白酶水解物钙螯合修饰的最适宜条件为蛋白质水解度为5%、螯合pH为7.0、螯合温度为20℃、螯合完成时间为15min;无水乙醇分级分离可获得三种螯合组分,水不溶组分(CA)、50%无水乙醇不溶性组分(CB)和80%无水乙醇不溶性组分(CC);红外光谱分析表明,CA的钙紧密地与氨基和羰基基团结合形成螯合修饰物,并以钙为中心形成五元环,而CB和CC组分中钙只与羰基紧密结合形成环状结构;在这些螯合物组分中,CA具有最高的抗氧化活性,且高达α-生育酚的94%,而CC具有最高的抗大...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 赵永贞  陈秀荔  杨春玲  彭敏  何苹萍  陈晓汉  
采用RT-PCR技术克隆了凡纳滨对虾肌钙蛋白Ⅰ基因全长编码序列,对其核苷酸序列和编码的氨基酸序列进行了生物信息学分析,并在对虾肌钙蛋白Ⅰ基因的编码区查找了单核苷酸多态性位点。结果显示:本研究克隆获得了凡纳滨对虾肌钙蛋白Ⅰ基因的4个可变剪切体,其编码的蛋白质均具有Troponin超家族结构域特征,同源性比对发现该蛋白的氨基酸序列在节肢动物中高度保守。系统进化分析发现凡纳滨对虾Tn-Ⅰ3和Tn-Ⅰ4与中国对虾和小龙虾的Tn-Ⅰ遗传距离较近,而Tn-Ⅰ1和Tn-Ⅰ2单独聚为一支,且与其他物种Tn-Ⅰ遗传距离较远;通过测序比较不同个体凡纳滨对虾Tn-Ⅰ基因序列发现在Tn-Ⅰ的4种不同剪切体编码区共同序...
[期刊] 上海水产大学学报  [作者] 李宝山  冷向军  李小勤  刘贤敏  胡斌  李家乐  
分别进行了二个试验以考察饲喂蚕豆对不同规格草鱼生长性能,肌肉成分和肠道蛋白酶活性的影响。试验Ⅰ以配合饲料,浸泡蚕豆或发芽蚕豆饲喂平均体重(535±50)g草鱼77 d;试验Ⅱ以配合饲料、发芽蚕豆饲喂平均体重(84.5±3.5)g草鱼68 d。结果表明,在两个试验中,与摄食配合饲料的草鱼相比,摄食浸泡蚕豆或发芽蚕豆均极显著降低了草鱼增重率(P<0.01),提高了饲料系数(P<0.01);鱼体肌肉粗脂肪含量极显著降低,胶原蛋白含量上升(P<0.01);前肠道蛋白酶活力极显著下降(P<0.01)。研究表明,投饲蚕豆可改变草鱼肌肉成分,但对草鱼生长性能和肠道蛋白酶活力有显著抑制作用。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 杨华  刘玉花  马俪珍  孔保华  
【目的】利用羊骨中胶原蛋白以获得免疫调节活性肽。【方法】利用木瓜蛋白酶对羊骨蛋白进行酶解,采用四元二次通用旋转设计,考察酶用量(E/S)、水解温度(Temp)、水解时间(t)和底物浓度(S)对免疫活性的影响,并选出最佳的酶解条件。同时采用Folin-酚法测定了酶解产物中可溶性肽的含量,采用SAS软件分析可溶性肽含量与免疫活性之间的相关关系。经Design expert7.1.2软件优选最佳酶解条件。【结果】得出木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:酶用量(E/S)1576U·g-1,水解温度为(Temp)64.05℃,水解时间(t)7.22h,底物浓度为(S)0.271kg·L-1。可溶性肽含量与免疫活...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈立娟  李欣  李铮  李培迪  李仲文  张德权  
【目的】通过激活蛋白激酶的活性提高羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平,分析磷酸化水平的提高对羊肉肌原纤维蛋白降解程度、收缩功能的影响,进一步揭示蛋白质磷酸化对羊肉肌肉嫩化的作用机理。【方法】通过添加蛋白激酶A激活剂Forskolin、蛋白激酶C激活剂佛波酯(PMA),提高蛋白激酶的活性,改变羊肉肌原纤维蛋白的磷酸化水平。比较激活剂处理组与空白对照组肌原纤维小片化指数(MFi)、条带降解程度、肌节长度等指标的差异,确定蛋白质磷酸化水平对羊肉肌肉收缩和肌肉降解的影响。【结果】将羊肉样品在蛋白激酶溶液中培养24 h,在培养结束后1、2和4 h,PMA处理组(PkC激活组)的蛋白激酶活性显著高于空白对照组(...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 杨倩  熊善柏  王婷婷  李福存  
观察了胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解米渣蛋白的条件及其水解度对合成类蛋白反应的影响。结果表明:胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解大米蛋白的最适温度分别为50℃、60℃和60℃,最适起始pH值分别为10.0、11.0和1.0,底物浓度分别为7%、5%和5%,E/S为1%、3%和7%,水解时间为4 h;该条件下,3种酶水解大米蛋白的水解度分别为54.0%、71.4%和57.3%,氮收率分别为56.3%、73.8%和58.1%;随着水解时间的延长,胰蛋白酶和胃蛋白酶水解产物中肽类组分变化小,而碱性蛋白酶水解产物中小分子的组分显著增加;大米蛋白水解产物的水解度对类蛋白反应的产率有显著影响,以胃蛋白...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 卢涵  
以鳙鱼肉为研究对象,测定-20℃下鳙鱼肉的肌原纤维、肌浆中的组织蛋白酶B及组织蛋白酶B+L活性、肌原纤维蛋白及肌浆蛋白的SDS-PAGE条带以及扫描电镜和透射电镜下的肌原纤维显微结构、质构、持水力(汁液损失及LF-NMR数据)随贮藏时间的变化。结果显示:鳙鱼片在-20℃下冻藏不同时间后再解冻,其组织蛋白酶仍具有较高的活性,肌球蛋白重链、肌动蛋白、肌钙蛋白T及原肌球蛋白随着冻藏时间的延长而降解,且出现了有可能是组织蛋白酶L酶解产物的20ku肌浆蛋白条带。扫描电镜及透射电镜的结果显示,在冻藏112d,肌纤维遭到了严重破坏,肌节中的A带及I带已经不能被清楚地辨别出来,M线几乎消失,同时鳙鱼肉的硬度及弹性随冻藏时间延长而大幅下降。鳙鱼肉的汁液损失、水分的T21、T22、P22均随着冻藏时间延长而显著上升,水分的P21随冻藏时间延长而显著下降。研究结果表明,鳙鱼肉在冻藏过程中,组织蛋白酶B及B+L参与了肌原纤维蛋白及肌浆蛋白的降解,从而破坏了鱼肉肌纤维微结构的完整,并造成了鳙鱼肉质构及持水力的劣化。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 何平  黄家乐  史清翠  巫光宏  初志战  黄卓烈  
【目的】探寻疏水参数(logP)不同的有机溶剂对木瓜蛋白酶及其固定化酶活性的影响。【方法】制备固定化木瓜蛋白酶,在疏水参数不同(logP=-1.30,-1.10,-0.76,-0.33,-0.24,0.28,0.49,0.68,0.80,1.31,1.80,2.0,2.5,3.5和5.0)的15种有机溶剂及其不同体积分数(φ=5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,50%,60%和70%)的溶液中,测定木瓜蛋白酶及其固定化酶的活性,以不含相应有机溶剂的0.1 mol/L pH 7.2磷酸缓冲液或Tris-盐酸缓冲液为对照,分析不同有机溶剂及其体积分数对酶活性的影响。【结果...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 张艳  李欣  李铮  李蒙  刘永峰  张德权  
【目的】通过测定冰温贮藏及冷藏过程中肌肉肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平,分析冰温贮藏对蛋白质磷酸化水平的影响,为肉类冰温贮藏品质调控提供理论依据。【方法】选取大尾寒羊与小尾寒羊杂交公羊的背最长肌于冷藏和冰温条件下成熟,分别在0.5 h、12 h、24 h、3 d、5 d、9 d取样测定蛋白激酶活性、肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的磷酸化水平。采用蛋白激酶活性测定试剂盒、运用酶联免疫的方法检测各处理组蛋白激酶的活性随贮藏时间的变化;通过SdS-PAGE电泳、荧光染色的方法得到全蛋白染色与磷酸化染色的肌浆蛋白与肌原纤维蛋白条带,运用QuAntity OnE软件分析各处理组各处理时间的肌浆蛋白及肌原纤维...
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