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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
付娇娇 王旭 刘海泉 孙晓红 谢晶 潘迎捷 赵勇
本研究比较分析了不同温度（４、１５、２５和３７℃）、ｐＨ（４、５、６和７）及ＮａＣｌ浓度（０．５％、２．５％、４．５％和６．５％）对单增李斯特菌野生型菌株（ＷａＸ１２）及ｓｉｇＢ缺失突变型菌株（ＷａＸ１２－ΔｓｉｇＢ）生物被膜形成能力的影响。结果表明，相比于ＷａＸ１２菌株，ＷａＸ１２－ΔｓｉｇＢ菌株生物被膜的形成量显著降低（ｐ＜０．０５）。变异系数分析显示，不同培养条件对ＷａＸ１２菌株及ＷａＸ１２－ΔｓｉｇＢ菌株生物被膜形成能力均有影响，其中温度的影响最大，ＮａＣｌ浓度次之，ｐＨ最弱；且ＷａＸ１２－ΔｓｉｇＢ菌株生物被膜形成能力更易受到培养条件的影响。其次，分别选取了ＷａＸ１２菌株与ＷａＸ１２．．．
关键词：
单增李斯特菌 生物被膜 sigB
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
莘似韵 孙晓红 徐忆宁 赵勇 吴启华 潘迎捷
为探究超高压处理对单增李斯特菌被膜形成能力的影响。以2株4b血清型的单增李斯特菌(Wa X12、ATCC13932)为研究对象进行超高压处理(100500 MPa,15 min,20℃),通过24孔板结晶紫染色方法对2株菌生物被膜形成能力进行检测,结合荧光显微镜和扫描电镜来观察生物被膜形成情况。Wa X12比ATCC13932形成被膜的能力强。100 MPa压力处理显著增强Wa X12的被膜形成能力(P
关键词：
超高压 单增李斯特菌 生物被膜 SEM
[期刊] 华北农学报
[作者]
卢海亭 乔军 孟庆玲 彭叶龙 陈诚 刘田莉 才学鹏 陈创夫
为了解非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)分子伴侣蛋白Hfq在LM毒力中发挥的调控作用,在构建LM-Δhfq缺失株的基础上,通过动物攻毒试验检测野毒株LM-SB5与缺失株LM-Δhfq对昆明系小鼠的LD50,肝、脾载菌量及对肝、脾、肾的病理损伤;通过溶血试验检测二者的溶血活性;通过结晶紫染色的方法检测二者的生物被膜生成能力。以分析hfq基因缺失对LM毒力及生物被膜生成的影响。结果显示,与LM-SB5相比,LM-Δhfq对小鼠的LD50升高了6.067倍,毒力显著降低;肝、脾载菌量在第2
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘梅 黄艳 刘佳 叶可萍 李春保 周光宏
[目的]本文旨在研究绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌共存对单增李斯特菌的生长能力、毒力基因表达及细胞黏附能力的影响,揭示乳酸菌与单增李斯特菌之间的交互作用机制。[方法]采用膜隔离装置,取4℃贮藏条件下放置0、12、24、48和96 h的菌悬液分别测定单增李斯特菌和绿色魏斯氏菌的数量,同时提取单增李斯特菌的RNA进行反转录和荧光定量PCR,分析单增李斯特菌6种主要毒力基因(hly A、prf A、bsh、act A、sig B和inl A)的表达情况。利用Caco-2细胞进行绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌的竞争、排斥和置换试验,观察单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附效果。[结果]产细菌素绿色魏斯氏菌C1可降低单增李斯特菌的数量,而不产细菌素绿色魏斯氏菌C2对单增李斯特菌的生长影响不大。C1和C2的代谢产物使单增李斯特菌6种毒力基因表达量下调,且C1导致的下调趋势比C2大。C1主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附,而C2的作用较弱。[结论]产细菌素绿色魏斯氏菌C1比不产细菌素绿色魏斯氏菌C2能够更好地控制单增李斯特菌的生长,抑制相关毒力基因的表达,并主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附。产细菌素绿色魏斯氏菌C1可作为单增李斯特菌的防控菌株。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周阳 祝长青 郭桂萍 徐幸莲 徐宝才 薛建丽 蒋原 杨军 郭云昌 刘秀梅 付瑞燕
【目的】确定适用于不同条件下快速检测单增李斯特氏菌的方法。【方法】以单增李斯特氏菌标准菌株CMCC54004和市售盐水鸭、凉拌菜为研究对象,按照国家食品安全标准(GB 4789.30-2010)对检测样品进行选择性增菌培养,选择阴性样品进行人工布菌,比较单增李斯特氏菌蛋白条检测法、CPA恒温扩增法以及实时荧光PCR方法的检测效果,并以传统平板分离法进行验证。【结果】蛋白条检测法操作简单但灵敏度低,最低检测限为106cfu/mL;实时荧光PCR方法灵敏度高,最低检测限为101 cfu/mL,但操作繁琐,对操作技术及实验室条件要求较高;CPA恒温扩增方法灵敏度相对较高,最低检测限为105 cfu/...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁甜 董庆利 王璐 马美湖 金永国
在不同温度下,对单增李斯特菌在营养肉汤中的生长建立动力学模型,并对所建立的模型进行验证。使用Gompertz模型描述特定温度下单增李斯特菌随储藏时间变化的生长状况,对得出的最大比生长速率分别建立Linear、Square root和Ratkowsky预测模型,并对所建立的模型进行比较验证。结果表明:Ratkowsky模型对最大比生长速率-温度拟合度最高(R2=0.999 7),经验证,该模型可以很好地预测单增李斯特菌在营养肉汤中的生长情况。
关键词：
单增李斯特菌 营养肉汤 预测模型 验证
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王辉 刁有祥 孟凡磊
将在含体积分数为0.050%、0.001%的尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的LB培养基中培养的血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),分别以3×109CFU.只-1的菌量对30日龄小白鼠进行接种,观察不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠致病性的影响.结果表明:用0.001%NAD培养的血清5型APP对小白鼠的致病性较强,小白鼠接种APP后,多数表现肺脏严重出血;而用0.050%NAD培养的血清5型APP接种小白鼠后,只有少数小白鼠肺脏出血严重,多数表现为轻度出血.将上述条件培养的APP按常规方法制备油乳剂灭活疫苗,分别在第3周龄和第6周龄对小白鼠进行免疫接种,在2免后3周对免疫的小白鼠进行...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
程媛媛 张彦明 向华 康恺 李艳明 徐磊 董玲娟 张三东
【目的】建立牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌的双重PCR检测方法。【方法】根据布鲁氏菌IS711序列和单增李斯特菌毒力因子HlyA序列设计并合成引物,建立双重PCR检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检测,并制备污染模型乳,通过直接检测、增菌后检测、细菌富集后增菌检测,确定最低检测限。【结果】建立了牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测方法,该方法特异性好、敏感性高、可重复性好。布鲁氏菌和单增李斯特菌单PCR检测最小DNA质量浓度分别为0.282和3.33 pg/μL,双重PCR检测最小DNA质量浓度分别为2.82和33.3 pg/μL。感染模型乳不经过增菌,布鲁氏菌和单增李斯特菌最低检测...
关键词：
布鲁氏菌 单增李斯特菌 双重PCR 牛奶
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高瑀珑 鞠兴荣 邱伟芬 吴定 江汉湖
【目的】研究超高压作用对单核细胞增生李斯特氏菌(LM 54004)细胞膜、氧化磷酸化和F0F1-ATP酶的影响。【方法】用原子吸收法测定LM 54004经超高压作用后细胞内金属离子(K+、Mg2+)的泄漏;以亲脂性阳离子四苯基溴化膦([3H]-TPP+)作为放射性探针标记LM 54004细胞膜,测定经超高压作用后细胞膜电位的变化;用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(cFSE)为荧光探针测定经超高压作用后细胞内pH的变化;用比色法测定超高压对LM 54004 F0F1-ATP酶活性的影响。【结果】150—300 MPa作用10 min,随着压力的增大LM 54004菌落数显著降低,细胞内K+和Mg2+没有...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐本锦 李新平 王新 张静 周婷 夏效东 杨保伟 席美丽 孟江洪
【目的】了解陕西杨凌辖区生猪肉、生羊肉、生鸡肉、速冻饺子和即食食品等5类食品中单增李斯特菌的污染情况及其耐药性和血清型,为确保食品安全提供依据。【方法】随机采集杨陵2家超市及1家农贸市场的食品样本共计95个,其中包括生猪肉27份、生羊肉11份、生鸡肉38份、速冻饺子6份和即食食品13份,按照国标GB/T4789.30-2008进行单增李斯特菌的分离培养,用PCR方法进行单增李斯特菌的确证,并用多重PCR法对确证菌株进行血清型测定,采用琼脂稀释法进行药敏性试验。【结果】95个样本中,单增李斯特菌的分离率为13.7%(13/95),其中以即食食品分离率最高,为30.8%(4/13);其次是生鸡肉和...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
史唯地 马勋 刘彩霞 寇丽君 吕双飞 任慧杰 曾东东 王静 孔翠莲 高盛杰 钱瑞宣
为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用，本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(help))和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_(native)),测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况；RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平。结果显示：1)EII基因缺失株LM928ΔEII构建成功，重组回补质粒pIMK2-EII和pIMK2-EII-P_(native)及回补株CLM928ΔEII-P_(help)和CLM928ΔEII-P_(native)构建成功。2)在体外培养下，EII对LM的生长曲线没有影响。但在侵染HCMEC/D3后，LM928ΔEII在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P0.05),而CLM928ΔEII-P_(help)在2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李欢 钟秋萍 王微微 吴山功 邹红 李文祥 王桂堂
为探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道固有纤维素降解菌群及其酶活,从冬天禁食条件下的野生草鱼肠道粘膜分离培养的细菌中随机挑取22个单菌落,经筛选得到8株纤维素降解细菌,测量了它们降解纤维素所产生的水解圈的大小,并进行了16 S rDNA序列测定。结果显示,不同细菌(菌株)之间纤维素降解能力存在显著差异(F=4.03,P
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢海亭 乔军 孟庆玲 彭叶龙 田路路 贡莎莎 才学鹏 陈创夫
【目的】本文研发了MO重组活疫苗。【方法】利用PCR技术从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因上下游同源片段a、b,从pMD19-T-meAg15中扩增出MO meAg15目的片段,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将扩增得到的3个基因片段融合成ameAg15b,将其克隆测序鉴定。将ameAg15b目的基因亚克隆到pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ameAg15b重组穿梭质粒,将该重组穿梭质粒电转化至LM-SB5感受态细胞,在氯霉素、高温双重压力筛选重组菌LM-Δrli60-ameAg15b
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈怀青 陆承平 赵肖
嗜水气单胞菌是引人注目的人-兽-鱼共患病的新病原。嗜水气单胞菌致病菌株,不管来源如何,均可产生一种相同或相近的外毒素。外毒素与细菌的致病性关系密切,是重要的致病因子。作者从患暴发性传染病的病鱼中分离到致病性嗜水气单胞菌,发现该菌能产生一种具有溶血性、肠毒性、细胞毒性和动物致死性等多种生物学活性的外毒素,并将其命名为 HEC 毒素。嗜水气单胞菌 HEC 毒素的提纯、特性分析及其在致病中的作用已有报道,然而该毒素产生的调控机制并不完全清楚。本文报道了培养条件对嗜水气单胞 HEC 毒素产量的影响。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
成小飞 花晓梅 李文钿
以马尾松种胚作外植体进行不定芽诱导。基本培养基的种类对外植体不定芽的诱导起着决定性的作用，在ＧＤ附加２．０ｍｇ／ＬＢＡ的培养基上，外植体不定芽诱导率达７０％以上。ＩＡＡ或ＮＡＡ的加入不利于外植体不定芽的诱导。在不定芽生长培养基中，加入适量的ＩＢＡ能促进不定芽的伸长生长。伸长至０．５ｃｍ以上的嫩枝在１／２ＧＤ附加４．０ｍｇ／ＬＩＢＡ的培养基上，生根状况良好。生根后的小植株，在１／２ＧＤ培养基上接种Ｒｔ４９菌根真菌，菌丝侵染进入根部，形成组培菌根植株。
关键词：
马尾松,离体培养,菌根
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