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[期刊] 林业科学研究
[作者]
张启燕 高暝 吴立文 汪阳东 陈益存
[目的]对油桐种仁不同生长时期的油体蛋白进行定量蛋白质组研究,鉴定油桐种仁油体蛋白质的组成,探讨不同生长时期种仁油体蛋白质组的表达差异。[方法]采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术提取3个不同生长时期的油桐种仁油体蛋白质组,质检合格的蛋白经酶解、iTRAQ标记后进行高效液相、质谱检测。利用Mascot软件对转换的二级质谱数据进行蛋白质鉴定,通过iTRAQ定量寻找差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路和聚类分析。[结果]在3个生长时期成熟油桐种仁油体亚细胞器中共鉴定出5 632个蛋白,其中,2 639个具有催化活性,401个蛋白质参与脂肪酸及油脂的合成与代谢。在种仁成熟的3个生长时期中,共有3 430个油体蛋白的表达量发生了显著变化。油体差异蛋白的富集分析发现,具有催化活性这一分子功能的差异蛋白主要在油脂积累初期发生富集。在桐油和桐酸积累时期,参与脂肪酸代谢和油脂贮藏的酰基辅酶A氧化酶、DGA蛋白和油质蛋白(Oleosin)表达量显著上升,表明这些蛋白在调控桐油和桐酸的积累中可能发挥着关键作用。[结论]获得油桐种仁成熟过程中动态特异的油体蛋白质组表达谱,揭示油体蛋白质组的组成、主要调控桐油合成的关键酶和结构蛋白,为进一步研究油脂的合成与油体的装配等相关机制奠定了基础。
[期刊] 林业科学
[作者]
孙颖 谭晓风 罗敏 李建安
利用RNA-seq技术对油桐2个不同发育时期的花芽的转录组进行比较分析,获得大量差异表达的unigene序列。通过GO分类和Pathway富集性分析,将这些差异表达unigene分别归类于55个GO term和128个代谢途径。unigene中有103个与植物开花相关,涉及4个开花调控途径(光周期途径、春化途径、GA途径和自主途径)。随着花芽发育,越来越多的unigene表达量呈现上调趋势,上调的基因数量超过下调基因数量。研究结果可在一定程度上解析油桐花芽形态分化的分子调控模式与机制。
关键词：
油桐 花芽 转录组测序 开花基因
[期刊] 林业科学研究
[作者]
周冠 汪阳东 陈益存 李鹏 张姗姗 张小平
以木本油料植物油桐为研究对象,通过预实验选择种子成熟过程中脂肪酸转变关键时期,构建油桐种仁cDNA文库,并进行部分测序。初级文库的滴度为1×106pfu.mL-1,重组率为99.7%,插入片段大小为0.5~2.5 kb,平均约1 kb。通过测序获得的功能基因类型主要包括抗性基因、油体蛋白基因、贮藏蛋白基因及种子发育相关基因等,还有大量的未知功能基因和其他基因存在,各类基因的表达丰度不一。着重对首次分离到的油桐油体蛋白oleosin基因序列进行了同源性和蛋白结构预测分析。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂红毅 钟晓武 衣启营 张利平 邹勇 赵萍
【目的】研究家蚕不同发育时期精巢组织中小热激蛋白(sHSP)变化,为阐明其在家蚕精子发生中的重要作用提供理论参考。【方法】利用双向电泳技术建立家蚕5龄第5天、化蛹第1天和化蛾第1天3个时期的精巢电泳图谱,并用Imagemaster2D 6.0软件分析不同时期图谱中的差异蛋白,再用基质辅助激光解析离子质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。【结果】鉴定出家蚕精巢中5个小热激蛋白,分别为sHSP23.7、sHSP20.8、sHSP 20.4、sHSP19.9和sHSP19.8,它们在化蛹第1天和化蛾第1天的蛋白合成量比5龄第5天显著降低。【结论】在家蚕精巢中,5龄第5天是形成有核精子的...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
占志勇 陈益存 韩小娇 崔琴琴 汪阳东
为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol.L-1尿素,2 mol.L-1硫脲,4%CHAPS,65 mmol.L-1DTT,2%IPG buffer)裂解之后,上样700μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。
关键词：
油桐 双向电泳 蛋白质组学
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
羊杏平 张曼 徐锦华 刘广 姚协丰 李苹芳
［目的］通过对西瓜幼苗根系不同发育时期的蛋白质组变化的研究，从蛋白质表达水平上来揭示西瓜幼苗根系发育的分子机制。［方法］采用双向电泳技术对西瓜根系不同时期的蛋白质组进行比较，对差异蛋白质点进行图谱分析和ＭＡＬＤＩＴＯＦ／ＴＯＦ质谱鉴定，采用荧光定量ＰＣＲ技术（ＲＴ－ｑ ＰＣＲ）对候选蛋白基因进行表达验证。［结果］共得到１２个差异表达蛋白质点，１２个差异蛋白表现不同的表达趋势，其中上调表达４个，下调表达２个，不规则表达６个。经质谱分析，１１个蛋白得到鉴定，对鉴定出的蛋白进行功能分析，其中１０个蛋白分别涉及蛋白质生物合成（２０％）、代谢相关（４０％）、防御应答（３０％）和ＧＡ信号途径（１０％），１．．．
关键词：
西瓜 根系发育 蛋白质组 表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
高利艳 王爱丽 李小辉 晏月明
以京411为材料,研究了籽粒不同发育时期清球蛋白、谷蛋白和醇溶蛋白三个亚蛋白组的合成与积累特征.采用不同的蛋白提取方法,分别利用双向电泳(2-DE)和生物质谱技术(MS)、SDS-PAGE电泳以及反相高效液相色谱(RP-HPLC)等主要蛋白质组技术进行了鉴定与分析,初步得到了三种蛋白的合成与积累特征,为今后小麦发育蛋白质组学以及品质改良研究提供了科学依据.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宪云 刘钊 曹英豪 白辉 刘丽娟 李莉云 刘国振
【目的】通过对水稻骨干亲本在不同发育时期的蛋白质表达特征研究,了解其形成机理并促进其应用。【方法】采用Western blotting调查了6个水稻骨干亲本(9311、培矮64s、特青、珍汕97B、广陆矮4号和矮脚南特)在不同生长发育时期/部位(苗期地上部与地下部、开花期剑叶和穗子、成熟期剑叶和穗子)与光合作用、活性氧清除及胁迫防御相关的9个蛋白质的表达。【结果】9个蛋白质的表达在不同骨干亲本间有多态性,尤其在地下部和穗子等部位的表达差异较大,而在叶片中的表达比较接近;此外,蛋白质表达在不同生长发育时期/部位间也有多态性,反映了蛋白质表达的时空特异性。【结论】初步建立一条利用蛋白质特异抗体了解...
关键词：
水稻 骨干亲本 蛋白质 多态性
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘力 龚宁 夏国华 吕健全 黄坚钦
以3个地区50个山核桃初选优树为试样,研究了地域分布和单株在种仁粗蛋白、氨基酸组成和氨基酸含量诸性状上的差异。结果表明:(1)临安、淳安、安吉三地区山核桃种仁粗蛋白含量平均值为113.0 mg.g-1,变异系数为9.73%;方差分析表明地域分布对粗蛋白含量的影响达到显著水平,具中等广义遗传力(H2=0.342 9)。(2)山核桃种仁富含17种氨基酸,其中含人体8种必需氨基酸中的7种,必需氨基酸占氨基酸总量的33.07%,并且比例是稳定的,变异系数仅1.63%;而氨基酸总量以及7种必需氨基酸的含量变异系数较大,均超过16%,尤以甲硫氨酸为最,达到64.92%。
关键词：
山核桃种仁 粗蛋白 氨基酸
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周天娥 房宇 冯毛 韩宾 张兰 李荣丽 李建科
【目的】通过对中华蜜蜂(中蜂)和意大利蜜蜂(意蜂)雄蜂胚胎发育期3个日龄差异蛋白质组和磷酸化蛋白质组进行分析,以探明中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育特征并了解雄蜂胚胎发育生物学,为蜜蜂遗传改良提供理论依据。【方法】采用双向电泳方法建立中蜂、意蜂雄蜂胚胎发育3个日龄的蛋白质组及磷酸化蛋白质组表达谱,获得图谱中蛋白质的分子量、等电点和表达量等信息,并对部分差异蛋白质进行质谱分析、功能鉴定和生物信息学分析。【结果】在雄蜂胚胎发育的第1、2、3日龄,中蜂表达332、362、340个蛋白质,其中111、117、112个蛋白质发生了磷酸化修饰;意蜂表达302、331、311个蛋白质,其中有107、110、106个发...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯毛 李建科
【目的】对王浆高产蜜蜂(浆蜂)(A.m.ligustica)和原种意大利蜜蜂(原意)(A.m.ligustica)1、3、6日龄工蜂咽下腺进行蛋白质组研究,揭示咽下腺在此阶段的发育特征。【方法】采用双向电泳方法对浆蜂和原意咽下腺进行蛋白质组研究,通过与已鉴定蛋白功能的咽下腺和蜂王浆蛋白质组图谱比较,推断部分蛋白的功能。【结果】浆蜂咽下腺在3个日龄表达的蛋白数(210、192、230)分别显著的高于原意(169、188、212),两蜂种均在6日龄表达蛋白最多(P<0.05)。浆蜂咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为119个,其中21个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,14个蛋白显著下调;原意咽下腺3...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
房宇 李建科
【目的】对原种意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica Spinola,1806)(意蜂)雄蜂的3d卵期发育进行蛋白质组研究,以探明该蜂种雄蜂卵期蛋白质表达调控方面的一些特点,从而揭示其发育的分子机理。【方法】采用双向电泳法对意蜂雄蜂卵期蛋白质组进行研究。【结果】3d的卵期发育中,按顺序分别检测到200、242、233个蛋白,这些蛋白的分子量在12.42～169.60kD,等电点为4.50～9.00。164个蛋白在3d卵期发育过程中均有表达,其中79个蛋白在3个日龄的表达量无显著差异(P>0.05),7个共有蛋白表达量随卵期发育呈显著上调(P<0.05)趋势,而4个共有蛋白...
关键词：
蜜蜂 雄蜂卵 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 中国农业科学
[作者]
房宇 李建科
【目的】比较王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.浆蜂)与原种意大利蜜蜂(Apis mellifera L.原意)雄蜂卵期3d发育阶段蛋白质组的特点。【方法】根据双向电泳所得表达谱,对两个蜂种雄蜂卵期发育的蛋白质的种类、等电点、分子量和表达量进行分析。【结果】浆蜂雄蜂卵期所表达的蛋白数(332、377和339)显著的高于相应日龄原意雄蜂卵期3个日龄所表达的蛋白数(283、305和293)(P<0.05),其中在两蜂种3个日龄共同表达的蛋白数为254个。通过雄蜂卵期3d发育过程蛋白质表达谱的比较,两个蜂种分别检测到274、298和285个共有蛋白。在这些共有蛋白中,浆蜂雄蜂分别有54、...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李建科 李华玮 张兰
【目的】20世纪90年代中国成功培育出的王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)是当今世界最优良的蜂种,使中国的王浆年产量高达2600多吨,占世界总产量的90%以上,稳居世界第一,通过对该蜂种不同发育日龄工蜂幼虫的蛋白质组进行研究,以探明其发育机理。【方法】采用双向电泳法对王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)不同发育期的工蜂幼虫进行蛋白质组研究。【结果】在幼虫期6d的发育过程中,2日龄、4日龄、6日龄幼虫中分别检测到了262、418、194个蛋白点。这些蛋白的分子量在12.2～88.2kD的较大范围之间,等电点在pH4.00～9.24之间。有84个蛋白在幼虫期整个发育过...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张兰 李建科 吴黎明
【目的】对中国特有王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)工蜂的3d卵期进行蛋白质组研究,以探明该蜂种卵期不同发育阶段蛋白质表达调控方面的一些特点。【方法】采用双向电泳法对王浆高产蜜蜂工蜂卵期蛋白质组进行研究。【结果】卵期发育的3d中,按顺序分别检测到160个、195个、176个蛋白,这些蛋白的分子量在17～80kD之间,等电点范围在4.00～8.40之间。其中44个蛋白在3d的卵期中均有表达,36%的共有蛋白随卵期发育呈上调趋势,而14%的共有蛋白随卵期发育呈下调趋势,另有39%的共有蛋白表达量在2日龄达到顶峰。结果还显示每天分别有89个、77个和80个特异的蛋白表达。除共有及特有...
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