- 年份
- 2024(5711)
- 2023(8019)
- 2022(6640)
- 2021(6027)
- 2020(4957)
- 2019(10825)
- 2018(10546)
- 2017(19023)
- 2016(10874)
- 2015(11689)
- 2014(11606)
- 2013(10951)
- 2012(10067)
- 2011(9031)
- 2010(8802)
- 2009(8153)
- 2008(7755)
- 2007(6753)
- 2006(5735)
- 2005(4897)
- 学科
- 济(35230)
- 经济(35174)
- 管理(30642)
- 业(26698)
- 企(20721)
- 企业(20721)
- 方法(15351)
- 数学(13559)
- 数学方法(13440)
- 农(11721)
- 学(11475)
- 财(10571)
- 中国(10132)
- 制(8968)
- 业经(8235)
- 贸(8192)
- 贸易(8192)
- 易(7981)
- 农业(7713)
- 体(7409)
- 环境(6969)
- 技术(6813)
- 银(6651)
- 银行(6595)
- 地方(6418)
- 融(6367)
- 金融(6360)
- 行(6282)
- 务(6196)
- 财务(6170)
- 机构
- 学院(151310)
- 大学(150852)
- 研究(56031)
- 济(55572)
- 经济(54371)
- 管理(53516)
- 理学(46874)
- 理学院(46277)
- 管理学(45276)
- 管理学院(45036)
- 农(41636)
- 中国(40147)
- 科学(39921)
- 农业(33546)
- 业大(32648)
- 京(32117)
- 所(30691)
- 研究所(28668)
- 中心(25020)
- 财(24559)
- 江(22673)
- 农业大学(22458)
- 院(20532)
- 省(20102)
- 财经(19848)
- 北京(19459)
- 技术(18670)
- 室(18652)
- 经(18197)
- 范(18165)
- 基金
- 项目(112529)
- 科学(85892)
- 基金(80883)
- 家(76131)
- 国家(75507)
- 研究(72040)
- 科学基金(61777)
- 省(45268)
- 社会(45127)
- 自然(43366)
- 基金项目(43267)
- 社会科(42673)
- 社会科学(42661)
- 自然科(42319)
- 自然科学(42298)
- 自然科学基金(41551)
- 划(38884)
- 教育(32547)
- 资助(32007)
- 编号(27114)
- 重点(26034)
- 计划(24975)
- 发(23686)
- 创(23584)
- 部(23369)
- 科技(23184)
- 科研(22615)
- 创新(22182)
- 业(21498)
- 成果(20712)
共检索到213565条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡勇 阿依木古丽 臧荣鑫 刘翊中 杨具田 乔自林 曹忻 徐红伟 吴建平
【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中,10%DMSO和5%DMSO+5%PVP组细胞存活率最高,与对照组相比差异不显著(P>0.05),其它各试验组复苏细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05);各试验组中10%DMSO...
关键词：
冷冻保存 前体脂肪细胞 绵羊 冷冻保护剂
[期刊] 中国水产科学
[作者]
舒雪密 叶欢 仲嘉 张鸣 罗江 刘源 杜浩
中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,以期建立高效的中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存方法。研究结果表明,实验设置的解冻温度(20、25、30和40℃)中25℃组冷冻保存效果最佳:解冻后细胞数目为(3.86±0.51)×10～5,细胞存活率可达(96.36±0.53)%;比较不同浓度组(500、1000和1500 mg/L)的谷胱甘肽、抗坏血酸和α-生育酚等3种抗氧化剂对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,结果显示,冷冻保存液中添加1000 mg/L α-生育酚的实验组,解冻后得到的细胞数目最多(7.64±0.34)×10～5,显著高于其他抗氧化剂添加组,细胞存活率可达(92.82±0.72)%;通过比较不同浓度(0.1、1.0和10μg/mL)的两种类型抗冻蛋白(AFPI和AFPIII)对中华鲟精原干细胞的冷冻保存效果,发现添加了1.0μg/m L AFPI的实验组解冻效果最好,解冻后得到的细胞数目为(6.85±0.19)×10～5,显著高于其他实验组,细胞存活率为(86.89±0.73)%。综上所述,中华鲟精原干细胞冷冻保存的最佳解冻温度为25℃,1000 mg/L α-生育酚作为抗氧化剂,和1.0μg/m L AFPI作为抗冻蛋白对其冷冻保存效果最佳。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
耿晓晖 富俊才 韩凯 陈东
为建立绵羊肌内脂肪前体细胞的体外培养模型,选用组织块法培养绵羊肌内脂肪前体细胞,制备用荧光染料PE(Phycoerythrin)标记的兔抗绵羊Pref-1蛋白的多克隆抗体,通过流式细胞术分离纯化脂肪前体细胞,对纯化后的细胞进行诱导分化以及油红O染色鉴定。结果表明:利用流式细胞仪能分选纯化出被标记的肌内脂肪前体细胞且分选率近30%;纯化后得到的细胞是功能活跃的脂肪前体细胞。研究表明,用绵羊羔羊肌肉组织采用组织块培养法可以建立绵羊肌内脂肪前体细胞培养模型,抗绵羊Pref-1蛋白多克隆抗体可以作为纯化脂肪前体细胞的工具。
关键词：
绵羊 脂肪前体细胞 多克隆抗体 细胞纯化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李鑫 张浩 王佳美 王永 俄木曲者 李艳艳 朱江江 林亚秋
为分析山羊KLF16对肌内前体脂肪细胞分化的调控作用,利用RT-PCR克隆得到山羊KLF16基因序列,利用生物信息学分析山羊KLF16基因序列特征,通过过表达、油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子水平分析过表达山羊KLF16后肌内脂肪细胞脂滴积聚及分化标志基因表达水平的变化。结果表明:1)克隆得到包含CDS区的山羊KLF16基因序列986bp,编码251个氨基酸,具有典型锌指结构;2)KLF16在山羊各组织广泛表达,其中腹部皮下脂肪组织表达量极显著高于其他组织(P<0.01);3)过表达山羊KLF16与对照组相比脂肪细胞脂滴积聚减少,分化标志基因PPARγ和PPARα极显著下调(P
关键词：
山羊 KLF16 过表达 脂肪细胞分化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李博宇 郭勇 倪和民 盛熙晖 陈余 王梁 王相国 肖龙菲 邢凯 齐晓龙
旨在研究不同抗冻保护剂对鸡精液的冷冻保存效果,并通过比较差异表达基因,以解释不同保护剂的抗冻机制。以海兰褐种公鸡为研究对象,检测了不同抗冻保护剂(保护剂Ⅰ和保护剂Ⅱ)冷冻保存后的精子活性,并利用Affymetrix表达谱芯片检测技术,对差异表达相关基因进行筛选。结果表明:1)保护剂Ⅰ组的精液冻后活力活率(27.05±1.22vs 47.65±5.89)显著高于保护剂Ⅱ组(20.65±1.50vs 35.15±5.15)(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
金鑫 张曼 王云鹤 魏方 温婧怡 杨银凤
本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
席利萌 罗军 杨地坤 王维 孙爽 史怀平 马雪瑶
【目的】探索渗透性冷冻保护剂甘油、乙二醇、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)对山羊精子的冷冻保护效果。【方法】采用假阴道法采集繁殖性能正常、健康、年龄2~4岁的6只西农萨能奶山羊种公羊精液,以Tris-卵黄为基础稀释液,分别添加体积分数为6%的甘油、3%和6%的乙二醇、3%和6%的DMSO、3%和6%的DMA,测定冷冻-解冻后精子活率、顶体完整性、质膜完整率、线粒体完整性、谷胱甘肽还原酶活性和丙二醛(MDA)浓度,对比不同冷冻保护剂对山羊精子的冷冻保护效果。【结果】甘油(6%)和乙二醇(3%,6%)组解冻后精子活率均极显著(P<0.01)高于DMSO(3%,6%)和DMA(3%,6...
关键词：
山羊 冷冻保护剂 精液 冷冻保存
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
黄佩龙 张绍志 虞效益 胡军祥
对玻璃化冻存后羊Ovis aries软骨细胞的存活率和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性进行了初步研究。结果表明:细胞存活率随着冻存时间的延长而逐渐下降,但下降速度不明显;SDH活性在玻璃化冻存1~20 d变化幅度较大,20~30 d下降趋势减弱,保持相对稳定。从各项指标来看,认为玻璃化溶液VSb组的冻存效果最好,在经过5,10,15,20和30 d的冻存后,其存活率分别为85.47%±1.78%,80.73%±1.81%,78.62%±2.06%,76.35%±2.58%和73.83%±1.49%,细胞SDH活性吸光度值分别为0.49±0.064,0.444±0.073,0.394±0.039,0....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
查程万 吴建 张锡英 贾超 刘红林 黄小国 梁国飞 吴望军
[目的]本文旨在探究不同冷冻时间对猪肌内脂肪(intramuscular fat, IMF)含量的影响并分析IMF含量和其他生产性状的相关性。[方法]从299头杜洛克×(长白×大白)三元商品猪群中随机挑选52头作为试验对象，测定屠宰前活体重、屠宰后胴体重以及相关肉质性状；采集倒数第3～4肋骨间的背最长肌，采用索氏抽提法分别测定0 d鲜肉样、-80℃超低温冻存90和180 d肉样的IMF含量。对3个不同时间点测定的IMF含量进行相关性与差异显著性分析，并对3个不同时间点的IMF含量与测定的生产性状的相关性进行比较分析。[结果]0 d与冻存90 d的IMF含量呈极极显著相关(r=0.75),2个时间点测定的平均IMF含量不存在显著差异(P>0.05),但与0 d相比，冻存90 d的平均IMF含量呈上升趋势；0 d与冻存180 d的IMF含量呈显著相关(r=0.29),但与0 d相比，冻存180 d测定的平均IMF含量极显著升高(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
朱士恩
胚胎玻璃化冷冻保存最重要的条件是胚胎细胞膜对抗冻保护剂的通透速度，即细胞内外液保护剂达到平衡的时间。温度及抗冻剂的种类不同，其通透速度各异。本试验将玻璃化抗冻液中常用的几种抗冻保护剂，如乙二醇、两三醇、二甲基亚砜、乙酰胺及丙二醇的通透性进行比较。
关键词：
通透性 抗冻保护剂 玻璃化 扩张囊胚 鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨永青 杨公社
设置养分贮存损失状态不同的4类培养液,分别添加一定浓度梯度的L-谷氨酰胺(L-G lu tam ine,L-G ln)培养大鼠前体脂肪细胞。通过形态学观察、M TT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态及增殖与分化的效果。结果表明,添加0 mm o l/L L-G ln的新鲜培养液和配制后4℃冷藏20 d,再添加0.685 mm o l/L L-G ln的培养液,均较利于前体脂肪细胞的增殖与分化;配制后4℃冷藏90 d的培养液,对前体脂肪细胞培养效果较差,添加L-G ln也不能使培养效果得到改善。另外,启封后的M 199和胎牛血清(F eta l C a lf Serum,FCS)分别冷藏不...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
胡琼 富俊才 慕向东
研究日粮中添加不同油籽对绵羊瘤胃内容物和体组织脂肪酸组成的影响。试验1选用4只体重接近、装有永久性瘘管公羊(无角陶赛特×小尾寒羊),进行4×4拉丁方试验,定量饲喂对照组日粮和含花生仁(PS)、亚麻籽(LS)、葵花籽(SS)3种不同破碎油籽的日粮。结果表明:日粮添加不同油籽对绵羊瘤胃发酵功能没有影响,但添加油籽后提高了瘤胃内容物中cis-9,trans-11-C18:2t、rans-11-C18:1的含量;试验2选用体重(18.4±0.7)kg生长期公羊(小尾寒羊)16只,随机分为4组,分别饲喂与试验1相同组分的日粮,结果表明:日粮添加不同油籽提高了绵羊背最长肌、皮下脂肪中cis-9,trans...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙文星 谷淑华 韩海银 褚维伟 喻世刚 陈杰
［目的］本文旨在研究核受体共激活蛋白２（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ２，ｎｃｏａ２）对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。［方法］用荧光定量ｐｃｒ（ｑｒｔ－ｐｃｒ）法检测ｎｃｏａ２在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化；通过ｎｃｏａ２小干扰ｒｎａ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｒｎａ，ｓｉｒｎａ）抑制内源ｎｃｏａ２的表达，并用油红ｏ染色检测沉默ｎｃｏａ２对肌内前体脂肪细胞分化能力的影响，通过ｑｒｔ－ｐｃｒ检测沉默ｎｃｏａ２对脂肪分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒγ，ｐ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
于玲玲 朱晓萍 岳春旺 刘海英 贾志海
【目的】研究日粮中不同硒(Se)水平和不同来源多不饱和脂肪酸(PUFA)对绵羊血浆和红细胞膜脂肪酸组成及抗氧化的影响。【方法】选用3月龄三元杂交肉用羯羊(无角陶赛特×小尾寒羊×夏洛莱,平均体重为26.3±1.2kg)32只作为试验羊,采用2×2因子(两个Se水平和两个PUFA来源)设计,随机分为4组,分别饲喂基础日粮+5%亚麻油(LO)、LO+2mg·kg-1硒(LOSe)、基础日粮+5%葵花油(SO)和SO+2mg·kg-1硒(SOSe)。硒以亚硒酸钠的形式添加。试验结束后颈静脉采血,分离血浆及红细胞膜,测定脂肪酸组成及抗氧化特征。【结果】日粮加硒提高了绵羊血浆和红细胞膜的抗氧化能力、血浆t...
关键词：
绵羊 硒 多不饱和脂肪酸 抗氧化
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
沈蔷 章海敏 施旆旆 胡军祥
以鲫鱼Carassius cuvieri未成熟的卵细胞为材料,研究了玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的存活率及琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。结果表明:鲫鱼卵细胞存活率在1~6 d下降明显,6~8 d下降趋势减弱,保持相对稳定;琥珀酸脱氢酶活性呈显著下降(P
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
