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[期刊] 水产学报
[作者]
陈寅儿 金珊 张樱 赵青松 王国良 王春琳
将扩增得到的三疣梭子蟹LGBP基因开放阅读框与表达载体pET-22b(+)连接,转化E.coil BL21(DE3)plysE后IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,发现诱导组比空载体和未诱导组多出一条分子量约为41 ku的表达产物,与预测的重组蛋白分子量大小基本一致。重组质粒在不同IPTG浓度和不同温度条件下诱导表达产物的SDS-PAGE分析结果显示,低浓度0.4 mmol/L IPTG和30℃诱导能有效减少菌体蛋白的本底表达。用纯化的重组蛋白连续免疫小鼠,4周后得到抗血清,经Western-blotting检测,其具有很好的特异性。微生物结合实验表明,重组表达的pET-LGBP具有较强...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯艳艳 李健 张德宁 刘萍 吕建建 高保全
取健康三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)‘黄选1号’80日龄幼蟹,体重(32.66±6.27)g。通过RT-PCR及Smart-TM Race技术,克隆了三疣梭子蟹谷胱甘肽S-转移酶(glutathiones-transferase,简称GST)基因c DNA全长序列(Gen Bank登录号:KF781517)。GST基因全长1 010 bp,编码一个由216个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点PI为5.294,分子量为24.59 k D。氨基酸序列中含有GST基因家族特有GST-N结构域和GST-C结构域。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹GST基因与中华绒螯蟹(...
[期刊] 水产学报
[作者]
崔晓雨 朱冬发 汤洁 谢熙 邱锡尔
为研究蜕皮激素受体(EcR)在甲壳动物生长和生殖过程中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了三疣梭子蟹蜕皮激素受体(PtEcR)基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KC354381),运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,分析该基因在不同组织、蜕皮时期和二次卵巢发育阶段的表达特征。结果表明,PtEcR cDNA全长2 231 bp,包含1 269 bp ORF,编码422个氨基酸;推导的PtEcR氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物EcR进行比对,发现一致性达67%~97%;系统进化树分析PtEcR与其它甲壳动物EcR聚为一支,而昆虫...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陆洋 吴旭干 潘桂平 王伟 候文杰 成永旭
雌激素相关受体（ＥＲＲ）在甲壳动物蜕皮过程中可能起着重要的调节作用，但是尚不清楚该基因在三疣梭子蟹不同组织和不同蜕皮阶段的表达模式。本文采用荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了三疣梭子蟹雌激素相关受体（ＰＴ ＥＲＲ）基因在不同组织和不同蜕皮阶段的表达情况。结果表明，ＰＴ ＥＲＲ－ｍＲＮＡ在Ｃ期三疣梭子蟹的Ｙ器官和鳃中表达水平最高，其次眼柄和胃中表达水平也相对较高，在３种肌肉组织和三角膜中表达水平较低。在不同蜕皮阶段，１３种组织中的ＰＴ ＥＲＲ－ｍＲＮＡ表达水平均差异显著。Ｙ器官中ＰＴ ＥＲＲ－ｍＲＮＡ从ＡＢ期到Ｅ期呈显著上升趋势；胸神经节和眼柄中的ＰＴ ＥＲＲ－ｍＲＮＡ变化模式均为先上升．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
谢熙 朱冬发 崔晓雨 汤洁 邱锡尔
为了研究法尼酸甲基转移酶(FAMeT)在甲壳动物蜕皮调控中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC192659),它包括一个201 bp的5'非编码区、一个318 bp的3'非编码区和一个825 bp的开放阅读框(ORF),编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%～97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF(CPAMD8/FAMeT)区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的F...
[期刊] 水产学报
[作者]
王伟 吴旭干 潘桂平 侯文杰 成永旭
为探究几丁质酶基因在三疣梭子蟹蜕皮过程中的生理作用,本研究通过转录组测序和RACE技术克隆了三疣梭子蟹几丁质酶基因(Pt Chi)c DNA全长(登录号:KF914663),并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在三疣梭子蟹不同组织及不同蜕皮阶段的表达情况。结果表明:(1)Pt Chi基因c DNA全长2 200 bp,包括5'非编码区(5'-UTR)16 bp、3'非编码区(3'-UTR)714 bp和开放阅读框1 470 bp,编码489个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点为53.97 ku和4.76。(2)Blast P结果显示,Pt Chi推导氨基酸序列与已知甲壳动物Ch...
[期刊] 水产学报
[作者]
陆洋 吴旭干 柳梅梅 巩杰 成永旭
实验通过活体注射、养殖实验和荧光定量PCR等方法,研究了不同浓度TAM对三疣梭子蟹雌体成活率、卵巢指数、肝胰腺指数及卵巢发育相关基因表达的影响,旨在探讨雌激素对甲壳动物卵巢发育的作用机制。结果显示,不同浓度TAM对雌体存活率和肝胰腺指数均无显著影响,但在一定程度上抑制了卵巢指数。不同组织中的卵黄蛋白原(Vg)、雌激素相关受体(ERR)、维甲酸受体(RXR)和蜕皮激素受体(EcR)基因表达均受到了TAM的影响:Vg基因在卵巢和肝胰腺中的表达水平明显受到TAM的抑制;低浓度TAM组(6.7和13.4μg/g)
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
环朋朋 吕建建 孙东方 高保全 刘萍
甲基转移酶是维持基因组甲基化状态的重要基因,本研究利用SMART-RACE技术克隆了三疣梭子蟹甲基转移酶(Pt DNMT1)基因。Pt DNMT1基因c DNA序列全长5919 bp,包括4832 bp的开放阅读框,编码1610个氨基酸,预测分子量为148.15 k Da,理论等电点为4.68。结构预测发现Pt DNMT1有两个特殊的结构域,分别是zf-CXXC锌指结构域和甲基转移酶家族特有的Dcm结构域,进化树分析显示Pt DNMT1基因与昆虫类的DNMT基因聚为一支。组织表达分析发现:Pt DNMT1
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张晓燕 李健 刘萍 陈萍 孙铭 葛红星
通过简并引物扩增及Smart TM Race技术,首次克隆了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蜕皮激素受体EcR基因cDNA全长序列。该基因全长2 996bp,编码一个由503个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点pI为7.33,分子量大小为55.69kDa。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹EcR基因与青蟹、拟穴青蟹、大西洋招潮蟹、陆地蟹、美洲螯虾、褐虾、日本对虾的同源性分别为94%、90%、88%、84%、82%、73%、66%。荧光定量RT-PCR结果表明,EcR在肝胰腺、卵巢、肌肉、眼柄、鳃和心脏中均有分布,在肝胰腺中表达量最高,在心脏中最低。高盐(45)胁迫下,...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄少君 许强华
为验证Ferritin基因是否对三疣梭子蟹的盐度胁迫具有适应性,利用PCR扩增获得了三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)第六对鳃的Ferritin基因,将该目的基因克隆到表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌DE3(BL21),并进行IPTG诱导表达。结果表明:经诱导的转pET28-Ferritin重组质粒菌株有特异的表达蛋白条带出现,与预期的理论值(19.448 kD)相符合;高盐胁迫下,转重组质粒的大肠杆菌比转pET28空载质粒存活率显著提高(P<0.001),并且随盐度升高,两者差异越显著。这表明Ferritin基因能够提高大肠杆菌的盐度耐受力,由此推测Fer...
关键词：
三疣梭子蟹 铁蛋白 原核表达 盐度适应
[期刊] 中国水产科学
[作者]
贾复龙 孟宪亮 刘萍 李健 高保全
本实验应用ＲＡＣＥ技术克隆获得了三疣梭子蟹（ＰｏＲｔｕｎｕｓ ｔＲｉｔｕｂＥＲＣｕｌＡｔｕｓ）周期蛋白依赖性激酶７（Ｃｄｋ７）基因Ｃ ｄｎＡ序列全长。基因５′和３′非编码区域（ｕｔＲ）以及开放阅读框的长度分别是２３ ｂＰ、１７８ ｂＰ和１０５６ ｂＰ，预测编码一个含有３５１个氨基酸，分子量为３９．９１ ｋ ｄ的蛋白质，包含一个丝氨酸／苏氨酸催化保守结构域和ｔ－ｌｏｏＰ结构。同源性分析表明，三疣梭子蟹Ｃｄｋ７氨基酸序列与其他物种Ｃｄｋ７相似度较高，说明Ｃｄｋ７基因具有很好的保守性。实时荧光定量ＰＣＲ结果显示，三疣梭子蟹Ｃｄｋ７基因在卵巢组织中的表达量显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５）。Ｃｄｋ７基因．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙东方 吕建建 环朋朋 高保全 刘萍
本研究采用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)蝗抗利尿肽(neuroparsin,PtNP)基因。该基因全长1920 bp,5￠端非编码区237 bp,3￠端非编码区1373 bp,开放阅读框309 bp,编码102个氨基酸,预测分子量10.8 k D,理论等电点7.42。PtNP含有12个半胱氨酸残基,具十足目动物蝗抗利尿肽典型的特征。同源性和系统进化分析表明,PtNP与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NP4的同源性最高(89%),并且三疣梭子蟹与拟穴青蟹首先聚为一支。组织表达分析发现,PtNP基因在脑组织中的相对表达量最高,其次是鳃和眼柄,在卵巢、肌肉、心脏和肝胰腺中表达量较低或不表达。通过分析PtNP基因在低盐胁迫过程中的表达规律发现,低盐胁迫可显著改变PtNP基因在脑、鳃和眼柄组织中的表达模式,整体呈现上调表达趋势,其中在脑、鳃和眼柄中表达量分别最高上调至7.7倍、2.8倍和2.6倍,且存在显著差异(P<0.05)。去除眼柄后该基因在鳃中的表达呈上升趋势,且去除双侧眼柄组的表达量显著高于去除单侧眼柄组(P<0.05)。本研究结果表明PtNP基因在三疣梭子蟹盐度适应中可能发挥一定作用且受神经内分泌系统的调控。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张凤 吕建建 刘萍 高保全 李健
为初步研究三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)几丁质酶PtCht3的生物学功能,利用特异性引物扩增和SMART(TM) RACE技术克隆获得三疣梭子蟹PtCht3基因全长c DNA序列,并对该序列进行分析。结果显示,三疣梭子蟹PtCht3基因全长为1409 bp,对PtCht3基因序列推导出的氨基酸序列进行分析可知,该基因编码由394个氨基酸组成的蛋白质,预测分子量为43.67 kDa,理论等电点为4.80。PtCht3蛋白亲水性总平均数为-0.097,属于稳定蛋白。同源性和系统
[期刊] 水产学报
[作者]
柳志业 朱冬发 谢熙 邱锡尔 周彦琦 沈锡权
细胞色素P450(CYP)302a1是昆虫蜕皮激素合成通路中的关键酶,为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用,实验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到了三疣梭子蟹CYP302a1全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM596851)。该序列全长为3 171 bp,包含一个长度为1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸;序列分析显示该氨基酸含helix-C、helix-K、helix-I、PERF及heme-binding共5个P450特征保守区域;系统进化树分析发现三疣梭子蟹CYP302a1与日本剑水蚤CYP302a1聚为一小支...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张龙涛 吕建建 高保全 刘萍 付萍
采用ＲＡＣＥ技术，克隆出三疣梭子蟹（ＰｏＲｔｕｎｕｓ ｔＲｉｔｕｂＥＲＣｕｌＡｔｕｓ）核受体基因ＨＲ３８的Ｃ ＤｎＡ全长，命名为ＰｔＨＲ３８。该基因Ｃ ＤｎＡ序列全长为２９５０ ｂＰ，５′和３′非编码区（ｕｔＲ）长分别为１０１ ｂＰ和５５１ ｂＰ，开放阅读框（ｏＲＦ）长２２９８ ｂＰ。推测编码７６５个氨基酸，预测分子量为８４．２ ｋ Ｄ，理论等电点为６．３。生物学分析预测，ＰｔＨＲ３８基因编码的蛋白属于不稳定蛋白，不具有跨膜结构域。同源性分析表明，ＰｔＨＲ３８基因编码的氨基酸序列与大型溞（ＤＡＰＨｎｉＡ ｍＡｇｎＡ）的同源性最高。实时荧光定量分析表明，ＰｔＨＲ３８基因在蜕皮周期的各个组织中均有．．．
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