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[期刊] 水产学报
[作者]
吴慧 侯利芬 黄嘉仪 冯浩
三倍体湘云鲫2号具有不育、生长快、抗病抗逆性强等优良特性。为探究其抗病优势分子机制,实验克隆及鉴定了三倍体湘云鲫2号干扰素a3(3nIFNa3)。3nIFNa3的CDS由552个核苷酸组成,编码184个氨基酸。经预测,3nIFNa3 N端23位氨基酸为信号肽;3nIFNa3成熟肽中存在2个半胱氨酸残基并参与形成二硫键,表明其隶属于Ⅰ型一组干扰素。实时荧光定量PCR (qPCR)结果显示,宿主细胞经poly I∶C刺激后8 h、草鱼呼肠孤病毒(GCRV)或鲤春病毒血症病毒(SVCV)感染后48 h,3nIFNa3的转录水平达到最高。免疫印迹和免疫荧光结果显示,3nIFNa3为分泌型蛋白,分子量约为21.8 ku,其在出胞前主要分布于细胞质中。进一步研究发现,在宿主细胞中过表达3nIFNa3或含3nIFNa3的上清培养基孵育宿主细胞均能诱导内源ISG基因转录水平的显著提高。其中,3nSTAT1及3nVIPERIN在含3nIFNa3的上清培养基孵育后2 h转录水平达到最高,3nPKR则在4 h表达水平最高。此外,病毒滴度测定及结晶紫染色实验表明,EPC细胞经3nIFNa3孵育或过表达3nIFNa3后,其抗GCRV和SVCV的能力均显著增强。研究表明,3nIFNa3为可分泌的细胞因子,在宿主抗病毒天然免疫反应中发挥作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘少军 孙远东 黎双飞 冯浩 李建中 周工建 张轩杰 刘筠
对三倍体湘云鲫和作为对照的二倍体日本白鲫的性指数进行了比较分析。三倍体湘云鲫的卵巢指数、精巢指数、脂肪型“性体”指数都分别低于日本白鲫的卵巢指数、精巢指数及两者的平均值。日本白鲫的卵巢指数是湘云鲫卵巢指数的 2 .85倍 ,日本白鲫的精巢指数是湘云鲫精巢指数的 1.94倍 ,日本白鲫卵巢和精巢的平均指数是湘云鲫脂肪型“性体”指数的 5 .6 0倍。具脂肪型“性体”的湘云鲫生长速度最快 ,其次是雌性湘云鲫 ,最后是雄性湘云鲫。根据性体指数对照 ,说明三倍体湘云鲫的性腺发育受到不同程度的抑制 ,其中脂肪型“性体”中生殖细胞的发育完全被抑制 ;卵巢发育的抑制程度大于精巢 ,其主要抑制效应表现在具有卵...
关键词：
三倍体湘云鲫 性腺发育 性腺指数 不育
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黎双飞 刘少军 张轩杰 罗琛 周工建 刘筠
用人工选育的异源四倍体鲫鲤 (♂ )与白鲫 (♀ )杂交获得具有明显生长优势的三倍体湘云鲫。采用差速离心和核酸酶处理等方法 ,从三倍体、白鲫和异源四倍体鲫鲤肝组织中提取线粒体DNA ,并用 9种限制性内切酶进行单酶酶切分析。经琼脂糖凝胶电泳后计算出各酶切片段的大小 ,测得三倍体、白鲫和异源四倍体鲫鲤mtDNA的分子大小分别为 16 .2 4kb、16 .6 0kb和 16 .2 0kb。根据各单倍型间的酶切片段共享度 ,估算出 3个群体间的遗传距离 ,说明了mtDNA母系遗传的特性。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱桂华
研究了湘云鲫的生长特性及应用效益。当年和二龄的湘云鲫比双亲个体增重分别快１５１１—１９６３％ ，１１５４—２５３５％ ；当年湘云鲫个体增重比异育银鲫快 ８８３—９２９％ ，比彭泽鲫快１４６６—１５８４％ ，比高背鲫快１９７８—２１７６％ 。
关键词：
湘云鲫,制种,生长对比,生产应用
[期刊] 水产学报
[作者]
周蓉 伍艳红 姚潇 凌欣 刘文彬 刘少军
为了探寻不同倍性鱼生殖育性的表观遗传调控规律，实验基于不同倍性鲫鲤精巢的转录本信息库设计引物克隆了不同倍性鲫鲤的ＭｅＣＰ２基因。序列比对结果发现，在远缘杂交的过程中基因组发生了遗传重组和变异。基于序列公共部分设计引物，通过半定量ＰＣＲ和实时定量ＰＣＲ的方法分析了ＭｅＣＰ２基因在不同倍性鱼发育过程中的时空表达特征。结果还发现，ＭｅＣＰ２基因在所有组织中都有表达，但在脑组织中的表达量最高；纵向对比性腺的发育过程，ＭｅＣＰ２基因的表达量会随着性腺发育成熟而下降；横向对比不同倍性鱼的性腺发育，ＭｅＣＰ２基因在三倍体鱼卵巢中的表达量明显高于二倍体和四倍体鱼，但在精巢中的表达量随鱼的倍性增加而增加。研究表．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
陶敏 刘少军 钟欢 周毅 宋灿 张纯 刘筠
为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列。结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘飞 张轩杰 刘少军 罗琛 周工健 刘筠
采用石蜡切片法和显微测量法研究了新型三倍体鱼—湘云鲫 (CarassiusauratusTriploid)、湘云鲤(CyprinuscarpioTriploid)消化道的组织结构 ,并探讨了消化道组织结构和食性之间的关系。结果表明 :湘云鲫、湘云鲤食道和肠道壁均由粘膜层、粘膜下层、肌层、浆膜层 4层组成 ,缺乏粘膜肌 ;二者消化道的组织结构与其各自的食性一致 ;二者食道粘膜上皮由单层柱状细胞和杯状细胞组成 ,这与其它鱼类的不同 ;湘云鲫比湘云鲤具有对食物更强的消化吸收能力 ;湘云鲫、湘云鲤肠道可分为前肠、中肠、后肠 3段。
关键词：
湘云鲫 湘云鲤 消化道 组织学
[期刊] 水产学报
[作者]
梁碧丹 卢金昭 梁海鹰 张美珍 申铖皓 张彬
为了探究肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor，TNFR)基因在马氏珠母贝中的免疫应答机制，本实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了马氏珠母贝TNFR27(PmTNFR27)基因cDNA全长并进行生物信息学分析，运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了马氏珠母贝在脂多糖(LPS)、聚肌胞苷酸(Poly (I:C))及镉胁迫后，PmTNFR27 mRNA在其不同组织的表达模式。结果显示，PmTNFR27 cDNA全长为1 524 bp，5′UTR长为186 bp，3′UTR长为248 bp，包含28 bp的poly(A)尾巴，开放阅读框(ORF)为1 062 bp，编码353个氨基酸；结构域预测表明PmTNFR27具有一个典型的CRD结构域和一个跨膜蛋白结构域，符合肿瘤坏死因子受体超家族特征；多序列比对结果显示，贝类种间的相似性不高，但功能结构域位置较保守。系统进化树结果显示马氏珠母贝与其他贝类聚为一簇。qRT-PCR结果显示，PmTNFR27 mRNA在马氏珠母贝各组织中均有表达，在鳃中相对表达量最高。LPS刺激后，PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量于3 h显著上升并达到最高值，于72 h降到最低值，最高值约为最低值的9.67倍；Poly (I:C)刺激后，PmTNFR27基因在鰓中的相对表达量在6、12 h显著上升并达到最高值，至96 h时降到最低值，最高值约为最低值的13.16倍。镉胁迫后，3 h相对表达量达到最高，24、48 h相对表达量显著下降。研究结果表明PmTNFR27可能参与了马氏珠母贝的免疫应答反应。本研究可为进一步探究TNFR在贝类中的生物学功能提供重要的理论基础和参考价值。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李屹铮 张帅帅 刘雪巍 张冉 林鑫辉 张猛 王磊 于淼 乔志刚 江红霞
为了探究日本沼虾(Macrobrachium nipponense)核糖体蛋白S3a(MnRPS3a)在其卵巢发育中的功能，利用cDNA末端快速扩增(RACE)-PCR技术获得了MnRPS3a基因的全长cDNA序列，并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光(IF)技术分别进行了该基因的表达模式和蛋白定位分析。结果显示，MnRPS3a基因cDNA全长902 bp,共编码266个氨基酸；MnRPS3a与墨吉对虾(Fenneropenaeus merguiensis)RPS3a氨基酸序列相似性最高，进化上的亲缘关系也最近；在不同组织中，MnRPS3a基因在肌肉中的表达量最高；在不同发育阶段卵巢中，MnRPS3a基因在Ⅰ期卵巢中的表达量最高；注射5-羟色胺(5-HT)能诱导日本沼虾卵巢MnRPS3a和卵黄蛋白原(Vg)基因表达升高，而注射多巴胺(DA)则抑制这2个基因表达。MnRPS3a蛋白主要定位于日本沼虾Ⅰ期和Ⅱ期卵巢的滤泡细胞、Ⅲ期和Ⅳ期卵巢卵母细胞的细胞质中。结果表明MnRPS3a可能在日本沼虾卵巢发育调控中发挥重要的作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李森 何川 胡瑞雪 顾泽茂
为研究Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ ３（Ｐｔｘ３）在鱼类中的作用，克隆得到异育银鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｇｉｂｅｌｉｏ）Ｐｔｘ３基因，并对其序列结构特征和表达模式进行分析。异育银鲫Ｐｔｘ３序列由３个外显子和２个内含子构成，编码４５３个氨基酸。异育银鲫Ｐｔｘ３蛋白的前２２ａａ为信号肽，２４１～４５３ａａ为Ｐｔｘ结构域；在Ｐｔｘ结构域有一个非典型的Ｐｅｎｔｒａｘｉｎ信号。同源进化分析发现，异育银鲫Ｐｔｘ３与其他鱼类聚为一支，且与斑马鱼最为相似（７９％）；两栖类和哺乳类各自聚为一支。实时荧光定量ＰＣｒ结果显示，Ｐｔｘ３在异育银鲫的心脏、肝脏、脾脏、头肾、体肾、鳃、脑、肌肉、肠、血液、性腺等１１．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨改霞 王春雨 龙连香 王世杰 顾丽姣
【目的】研究UGT198基因是否参与调控烟草抗虫性，为未来研究其参与调控杨树抗虫性奠定基础。【方法】前期通过分析公共转录组数据发现PtrUGT198在杨树响应虫害的转录组中高调表达，对其进行生物信息学及进化分析。以107杨为材料，克隆UGT198基因，构建过量表达载体，利用农杆菌介导法转化烟草获得过量表达转基因株系。进行棉铃虫饲虫试验初步验证UGT198基因是否参与调控抗虫性，分析UGT198基因在调控抗虫性中发挥的功能。【结果】PtrUGT198基因完整的ORF区为1440 bp，编码479个氨基酸，理论分子量为53.14 kDa，等电点为5.92，编码不稳定疏水性蛋白。PtrUGT198蛋白的二级结构α-螺旋占有41.75%、β-折叠占有14.61%、β-转角占有7.10%，无规卷曲所占比例为36.53%。PtrUGT198不存在跨膜区，预测其不属于膜蛋白，为非分泌性蛋白，该蛋白的磷酸化修饰以丝氨酸为主。同源序列对比结果显示PtrUGT198蛋白的C末端存在高度保守的植物次生产物糖基转移酶(Plant secondary product glycosyltransferase， PSPG)基序。系统进化树分析发现，PtrUGT198蛋白与同属植物毛白杨、银白杨和胡杨亲缘关系最近，其次和模式植物烟草有较近的亲缘关系。成功克隆杨树UGT198基因，构建pNC-UGT198基因过量表达载体，并转化烟草获得过量表达转基因株系，进行饲虫实验，得出高表达量烟草相对抗虫。【结论】首次成功克隆了UGT198 基因，并初步解析其调控抗虫性的功能，为深入了解UGT198调控杨树抗虫机理提供参考价值。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵春梅 范习 薛仁镐
为了解大豆ClassⅠ几丁酶基因(Chitinase gene)对不同胁迫响应的分子机制。利用PCR技术克隆了大豆ClassⅠChitinase基因的启动子片段(Gm CHI1p),序列分析表明,扩增片段(1 641 bp)与Gen Bank中的已知序列同源性达99.8%,且含有多个胁迫响应调控元件。利用GUS基因上游无启动子的表达载体p CAMBIA1391Z,构建GmCHI1p与GUS基因融合的植物表达载体pCAM-Gm CHI1p,并通过农杆菌介导法导入烟草中。在转基因烟草愈伤组织中检测到GUS活性
关键词：
几丁质酶 启动子 根特异性 伤害诱导性
[期刊] 草业科学
[作者]
张健 王彩霞 王迎春 郑琳琳
长叶红砂(Reaumuria trigyna)是一种珍稀泌盐盐生植物,其特有的盐腺结构是长叶红砂适应盐渍荒漠环境的关键,膜泡运输参与该植物的盐腺分泌过程。本研究基于盐胁迫下长叶红砂的转录组数据,克隆获得膜泡运输相关基因RtVAMP2-2。生物信息学分析发现,RtVAMP2-2基因的开放阅读框为1 074 bp,编码357个氨基酸;亚细胞定位和表达特性分析表明,该基因定位于细胞质膜,其表达受盐胁迫诱导;构建植物表达载体,将RtVAMP2-2基因转入拟南芥(Arabidopsis thaliana)中进行功能鉴定,结果显示,转基因拟南芥呈现盐敏感的表型,推测RtVAMP2-2基因可能在植物耐盐中发挥负调控作用。
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