验证了一种简便易行的斑马鱼性腺体表注射方法。首先解剖10条成年斑马鱼,精确测量并勾画出性腺的综合体表投影;然后注射阿尔新蓝染料确定注射路径和范围;再分别注射葡聚糖德克萨斯红和Sox9amyc过表达质粒与脂质体转染试剂混合物,48 h后分别用荧光显微镜和免疫印迹法检测荧光分布和融合基因表达。根据雄性斑马鱼平均体长、体宽和性腺的平均长宽,确定注射点位于斑马鱼胸鳍上端水平线与腹鳍前端竖直线相交处向上0.1 cm处。注射48 h后,发现阿尔新蓝和葡聚糖德克萨斯红多存在于性腺内部,部分标记了周围器官边缘部位;证实S

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建感紫光短波视蛋白（short-wave-sensitive 1，sws1）基因缺失的斑马鱼突变品系sws1~(-/-)。通过紫光照射实验，检测野生型AB品系和sws1~(-/-)突变品系在背腹皮肤中黑色素细胞的数量、黑色素合成相关基因pomc，asip、视黄酸合成相关基因raldh2和raldh3的表达量。结果显示：在紫光照射60 d和100 d后，sws1~(-/-)斑马鱼背部皮肤黑色素细胞数量显著少于野生型斑马鱼 （P

从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法克隆促性腺激素释放激素(GnRH)cDNA,其长度为646 bp,包括一个258 bp开放阅读框;编码的GnRH前体为86个氨基酸残基,由一个信号肽、GnRH十肽和一个由蛋白水解位点(Gly-Lys-Arg)连接的促性腺激素释放激素相关肽(GAP)组成;其中信号肽和相关肽的长度分别为24和49个氨基酸。该cDNA编码的GnRH的前体氨基酸序列与其他物种的GnRH前体基本一致。表明物种间GnRHcDNA的蛋白编码区高度保守,而非编码区的保守性程度很低。进化分析发现,斑马鱼与鲤、鲫、拟鲤、黑头软口鲦等淡水鲤科鱼类的同源性较高。

利用荧光定量ＰＣＲ技术，检测了眼柄粗提物对凡纳滨对虾（ＬｉｔｏＰｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）性腺发育相关基因（ＤｍＣ１、ｖａｓａ和ｖｔＧ）表达的影响，探讨性腺抑制激素（ＧｉＨ）在性腺发育过程中的调控机制，结果表明：ＤｍＣ１和ｖａｓａ只在凡纳滨对虾精巢和卵巢中表达；摘除眼柄后，精巢和卵巢中ＤｍＣ１表达量均显著性降低（Ｐ＜０．０５），而注射眼柄粗提物后精巢和卵巢中ＤｍＣ１表达显著增高（Ｐ＜０．０５）；相反，摘除眼柄后，精巢和卵巢中ｖａｓａ以及卵巢中ｖｔＧ基因表达量显著增高，但注射眼柄粗提物后性腺中的ｖａｓａ和卵巢中的ｖｔＧ表达量显著降低。结果表明眼柄粗提物通过影响生殖相关基因的表达影响凡纳滨对．．．

本研究探究了aldh3a2a在斑马鱼色素细胞发育中的意义及其对醛代谢和肝脏健康的影响。利用CRISPR/Cas9技术，成功构建aldh3a2a敲除纯合突变家系，导致黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞数量减少，csf1ra、pnp4a、itk下调，黑色素合成通路关键基因mitfa、tyrp1b和kita下调。转录组分析揭示了基因表达谱系的变化，差异基因scd、lpla和aox5在类固醇生物合成途径中下调，指示aldh3a2a对类固醇生物合成的关键作用。对视黄醇代谢通路的转录组分析和qpcr联合研究结果表明，aldh3a2a可以调控raldh2、rxrab以及aox5，表明其对视黄酸受体的信号传导有一定影响，同时aldh3a2a可以调控钾离子通道蛋白kcns3b，指示其对色素细胞的影响与钾离子信号传导有关。GO和KEGG富集分析发现突变体的细胞周期、同源重组、RNA降解、RNA转运、p53信号通路、真核生物核糖体生物发生、DNA复制、碱基切除修复、氨基酰基-tRNA生物合成、细胞质DNA传感通路、类固醇生物合成、错配修复、类固醇激素生物合成和醛酸盐代谢等通路也有着广泛影响。此外，aldh3a2a基因敲除会导致体内醛积累明显，产生细胞毒性进而引发肝脏体积异常增大、肝脏内出现空泡，体质量增加的表征，类似于Sj?gren-Larsson综合征的症状，揭示了aldh3a2a在斑马鱼体内的作用及其与人类遗传疾病的相关性，将有助于更深入地了解其在斑马鱼和人类中的功能和潜在的治疗靶点。

为了探究水流对鱼类体色的影响，比较了不同流速水流养殖下斑马鱼皮肤黑色素细胞数量和基因的表达，结果表明：相对于低流速（0.010 m/s），在高流速（0.022 m/s）下养殖斑马鱼3个月后，皮肤黑色素细胞数量显著增加，尤其是鱼体尾部区域；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果显示高流速组斑马鱼皮肤黑色素细胞标记基因kita、mitfa和tyrp1a相对表达量显著升高，黄色素细胞标记基因csf1ra显著降低，虹彩细胞标记基因pnp4a无显著变化，表明高流速水流诱导黑色素细胞而抑制黄色素细胞的形成。RT-qPCR结果显示，相比于低流速组，高流速组斑马鱼皮肤中黑色素细胞形成抑制因子基因asip1的相对表达量显著减少，与黑色素细胞形成相关的黑皮质素受体基因mc1r、阿黑皮素原基因pomca无显著性变化，视黄酸合成相关的视黄醛脱氢酶基因raldh2和raldh3显著下调，提示水流刺激可通过降低asip1的表达来诱导黑色素细胞形成；水流刺激瞬时受体通道蛋白基因trpv4和压电式机械敏感通道蛋白基因piezo2的表达上调，而piezo1无显著性变化。以上结果表明，水流能诱导斑马鱼黑色素细胞的形成，可能是通过皮肤机械力感受蛋白Trpv4或Piezo2介导水流刺激减少asip1表达的结果。Asip1除了调控黑色素细胞形成以外还调控脂肪的积累，相比于低流速组，高流速组斑马鱼肥满度也显著下降，GO富集分析显示差异表达基因主要富集到甘油三酯分解代谢、高密度脂蛋白颗粒、脂质结合等条目，差异表达基因显著富集的KEGG通路有：氨基糖和核苷酸糖的代谢、PPAR信号通路、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢等。RT-qPCR检测与脂肪代谢相关的脂肪酸过饱和酶2基因fads2显著上调，瘦素基因lep无显著性差异，提示水流可能通过Asip1影响Fads2进而影响脂肪降解。本研究首次报道了水流对鱼类体色的影响，为理解目前越来越普遍的流水养殖对鱼类体色和肥满度的影响提供了初步的理论基础。

cDNA -AFLP结合了RFLP和RT- PCR的优点,在无需了解序列信息的同时,集中显示基因组表达序列的多态性差异,灵敏性高,重复性好。但实验室开展常规的cDNA- AFLP研究需要昂贵的设备和大量的投入。本试验改用小面积变性聚丙烯胺凝胶电泳检测扩增产物,银染显带法来完成cDNA- AFLP的全套技术体系,使cDNA -AFLP分析方法更为简便、经济并减少污染。

为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对斑马鱼早期生命阶段下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关功能基因表达的影响，将斑马鱼的受精卵暴露于10、30和300μg/L DEHP溶液中，同时设置空白对照，96 h后，利用实时荧光定量PCR技术，测定斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴上12个功能基因的表达。结果显示，与对照组相比，30μg/L DEHP处理组的Cyp19b、GnRH3、Era和ERβ基因表达量显著升高，GnRH2、Pomc、Mr、Mc2r、Crh、Gr和Crhbp基因在各DEHP处理组表达量显著降低，FSH-β和Crhbp基因表达量无显著变化。以上研究结果表明：DEHP对斑马鱼胚胎/仔鱼阶段的2个主要内分泌分子通路产生了显著影响，将会导致内分泌功能的改变，从而可能影响斑马鱼的后期生长发育。

:用含HCG及鲤脑垂体 (PG)匀浆液提取物 (CPE)的W /O/W复乳 ,对塘养雌鳗进行注射催熟实验。雌鳗平均GSI达 35.18% ,最高达 56.5% ,其催熟效果较常规注射方法 (平均GSI 2 7.9% ,最高 50 .4 % )好。用含LHRH A、HCG、CPE的复乳和DOM生理盐水混悬剂对部分达到性成熟的鳗鲡进行催产 ,用W /O/W复乳诱导成熟的鳗鲡 ,排卵率为 75% ;用常规方法催熟的鳗鲡排卵率为 55%。注射复乳制剂后 ,鳗鲡血清GtH含量可较长时间的保持较高水平 ,血清GtH的变化较常规注射方法缓和。注射乳剂还可使鳗鲡脑垂体GtH含量升高。

[目的]为了探讨应激对断奶母猪繁殖障碍的影响机制,本试验以促肾上腺皮质激素(ACTH)注射所致的应激模型来研究应激对断奶母猪卵泡液中类固醇激素合成及卵泡促黄体素受体表达的影响。[方法]对10头苏淮断奶母猪进行颈静脉插管手术,随机均分为对照组与ACTH处理组(n=5)。手术第3天开始以每次间隔8 h给ACTH处理组母猪注射ACTH(1 IU·kg-1),对照组母猪注射生理盐水,连续注射7 d。利用ELISA方法检测受试母猪卵泡液中类固醇激素及血浆中皮质醇的含量变化;利用荧光定量PCR测定胆固醇侧链裂解酶(C

为建立斑马鱼（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）脑部细胞移植模型，先用红色荧光染料标记供体胚胎细胞，再移植细胞到ａＢ品系和两种转基因斑马鱼仔鱼脑部。荧光显微镜和组织学切片观察发现移植细胞沿组织或细胞间隙而不是通过血管向周围组织扩散，但细胞增殖分化不明显。在细胞移植２４ ｈ后，脑部组织学结构与对照组无明显差别。带有白血病基因的胚胎细胞在ａＢ仔鱼的脑部没有产生肿瘤样增生和转移。相比之下，正常胚胎细胞在白血病模型的仔鱼脑部非白血病细胞聚集区出现较多增殖和迁移。这些结果提示脑局部微环境不支持移植细胞的增殖分化；细胞移植只能弥补局部细胞的空疏而不能用作细胞替代治疗。

为方便对植物气孔进行发育和生理学研究,我们报道了一种用普通塑料透明胶带粘贴植物叶片下表皮,再刮去叶肉细胞保留叶片表皮观察气孔的方法,此方法与撕取法、粘取法等方法相比具有操作简单、制片效率高、适用面广等特点。在大豆,小麦,玉米等农作物上应用效果很好,适宜对不同发育阶段和时期的气孔分布、气孔变化动态和形态学指标的研究。

长散布核元件-1(Long spread nuclear element-1, LINE1)是跳跃基因。前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8～300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间的关系尚未明了。本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行了不同时间梯度的低温处理(18℃、5 d和18℃、30 d),同时对斑马鱼成鱼也进行了不同时间的低温处理(10℃, 3 h、6 h、1 d、3 d、5 d)。采用RT-qPCR检测了LINE1的mRNA水平,并克隆了斑马鱼LINE1基因启动子区,利用Luciferase双荧光报告系统,在ZF4细胞中验证LINE1 5’UTR在低温压力下的生物活性。结果显示,短时间低温处理下,ZF4细胞中LINE1 mRNA水平有所降低,而在长时间低温处理中,LINE1的mRNA水平显著升高。在成鱼中,短时间低温处理下,LINE1 mRNA水平降低;长期低温处理下,LINE1 mRNA水平显著升高。在ZF4细胞中发现,LINE1 5’UTR具有生物活性。在低温处理(18℃,3 d)下,报告基因信号减弱,间接表明LINE1启动子活性减弱。研究结果表明,低温压力会影响LINE1在鱼类中的表达。本研究为进一步探究LINE1在鱼类适应低温环境中的作用机制奠定了基础。

为了研究白三烯Ｂ＿４受体在斑马鱼发育和免疫中的功能，本实验利用ＲＡＣＥ技术克隆得到了斑马鱼白三烯Ｂ＿４受体样（ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ）基因ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ１和ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ２的全长ＣＤＮＡ序列，其分别编码３３９和３５６个氨基酸。序列和结构分析发现，其编码的２个蛋白均属于Ｇ蛋白偶联受体家族视紫红质蛋白亚族，并具有典型的Ｇ蛋白偶联受体的特征，与人的ＢＬＴ１同源度达３１％以上。进一步将２个基因与绿色荧光蛋白融合表达，发现其具有较好的细胞膜定位功能；ＷＥｓＴＥＲＮ印迹检测也证实，重组表达细胞的全细胞蛋白可与人源ＢＬＴ１的多克隆抗体发生特异性相互作用。此外，荧光定量ＰＣＲ分析结果显示，在斑马鱼幼鱼发育．．．

为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能。本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征，并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3dpf (days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量；qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示：chac1是母源基因，在受精后0-3 hpf (hours post fertilization)时其表达量较高，之后随着母本基因的影响逐渐变小，chac1的mRNA表达量下降；在斑马鱼成鱼中，其在肌肉、卵巢、脑中高表达；此外，突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比，其苏丹黑染色阳性信号更多；chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上，chac1为母源基因，其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。本研究结果为进一步研究chac1在造血及免疫相关疾病中的功能奠定了基础。