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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
柯涛 胡凡 石晴芳 马向东
为简化定向进化筛选突变耐高温和耐酸碱酶等极端酶的繁复工作,建立了一种快速质粒营救法,可直接从加热处理的平板中回收携带有突变基因的质粒,用于进一步的随机突变基因的筛选和基因测序等。研究了在不同的热处理条件下的质粒营救效率,获得了质粒营救转化效率最高的处理条件。结果表明,本方法适于质粒大小在2~10 kb范围的载体,可用于平板筛选最适酶活性温度在60~100℃、pH 4~10的突变体酶,并可将一轮的筛选过程缩短1~2 d。
关键词：
定向进化 筛选 质粒营救 极端酶
[期刊] 西南农业学报
[作者]
任鄄胜 李仕贵 肖培村 陈勇 张仁 谢丛简 孙泽武 赵慧霞
内江杂交水稻科技开发中心从恢复系"万恢88/内恢92-4"杂交组合F2代不育株选育的细胞质不育系,被暂时定名为"万恢88型水稻细胞质雄性不育系"。利用PAGE电泳、琼脂糖凝胶电泳和克隆测序等技术对其不育系和保持系线粒体基因组进行研究,分析其雄性不育的分子基础和分子机理。通过PAGE电泳发现,其不育系线粒体基因组PCR带型与野败型(WA)、印水型(ⅡA)、D型(D i)、冈型(GA)存在差异。对其不育系内香2A和保持系内香2B的差异片段回收测序,获得两条667 bp长度的m tDNA片段2A和2B,通过序列比对和电子杂交分析,获得片段为atp6基因的部分序列及其上游序列。2A和2B相比有3个碱基...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王家丰 齐海刚 李莉 张国范
长牡蛎(Crassostrea gigas)基因组具有高度的多态性。因此,导致传统的高分辨率熔解曲线(HRM)方法在长牡蛎基因组SNP分型验证中表现出很低的效率,并且传统HRM方法花费比较高。本文提出一种经过改良的适合高度多态性基因组SNP验证的HRM方法。这种two-step HRM方法在传统的HRM方法基础上进行了许多改进;利用这种改进的方法,使用一对引物即可准确完成一个特定SNP位点基因型的确定和区分,并且相应的花费较传统方法大大降低。本实验中共使用56组引物对长牡蛎SNP进行验证,有8组引物因为特异性较差在引物筛选中被排除。最终有30组引物成功验证SNP,成功率约为62.5%。超过63...
[期刊] 统计与决策
[作者]
伍兴国
很多模型结构突变研究都是在条件均值下开展的,分析条件分位数下的结构突变同样重要。文章针对线性分位数回归模型中,参数结构为临时性改变,提出了一种移动估计检验方法,并给出了在原假设条件下的极限分布,模拟结果表明该统计量具有良好的检验功效,同时检验功效与断点起始位置、终点位置、残差的分布、断点程度、模型形式、条件分位数、样本量等因素都存在紧密联系。
关键词：
移动估计 分位数回归 结构突变
[期刊] 统计研究
[作者]
韩猛 白仲林 缪言
为了内生地识别动态因子模型因子载荷矩阵的结构突变(包括因子个数的变化),本文利用主成分估计的伪因子序列构造累积平方和统计量检验因子载荷矩阵的结构突变性,进一步利用迭代累积平方和算法对多个结构突变点的位置进行探测。研究发现,本文提出的检验统计量对于因子个数误设具有稳健性;并且该检验具有良好的有限样本性质和渐近性;另外,实证分析发现,我国沪市A股市场中制造业上市公司的对数收益率序列存在结构突变的共同因子。
[期刊] 数量经济技术经济研究
[作者]
白仲林
本文根据Banerjee等(1992)的模型变换方法和内生突变点选择原理,得到了一种纵剖面时间序列相互独立面板数据的内生结构突变单位根的联合检验——■_T~*(λ)检验。并且,基于泛函中心极限定理推导出了该检验统计量的渐近分布;通过蒙特卡洛模拟实验讨论了该检验的实际检验水平以及面板数据的样本大小、异质性、截距突变的幅度、斜率突变的幅度和结构突变位置等因素对检验功效的影响。最后,根据1952～2006年中国27个省份的数据讨论了人均实际收入的稳定性。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
付修义 殷鹏飞 季生辉 贾博森 许静 杨小红
为探讨转录组测序在玉米质量性状基因克隆上的应用,以玉米自交系B73籽粒表现为白色的EMS突变体为材料,对该突变体授粉后15 d的籽粒进行转录组分析。通过与玉米B73参考基因组序列的比对分析,共鉴定到138个突变位点,其中51个突变位点对基因的功能有显著影响。通过基因功能注释与分类,发现该突变体在类胡萝卜素合成途径中的八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)发生无义突变,导致PDS蛋白翻译提前终止,阻断类胡萝卜素代谢途径中有色体番茄红素的生物合成,造成玉米籽粒白化。这些结果表明利用转录组测序技术能够快速准确地鉴定玉米EMS突变体的突变基因。
[期刊] 草业科学
[作者]
卢苗苗 谢明芳 白邦琴 眭顺照 马婧
为确定甲基磺酸乙酯(EMS)诱变多年生黑麦草‘爱神特’(Lolium perenne ‘Accent’)和高羊茅‘赤道’(Festuca arundinacea ‘Equator’)种子的最佳条件，获得性状稳定的突变材料和后代。利用不同浓度EMS在不同时间下诱变两个草坪草种，根据半致死浓度确定诱变组合。通过形态学、SCoT分子标记和生理指标测定筛选M_1和M_2代突变苗。结果表明：使用0.8%EMS溶液处理两个草坪草种36 h后播种，发芽率接近50%，诱变效果最佳。以该参数大规模诱变后，M_1代两个草坪草种诱变株移栽成活933株，再经短期干旱胁迫，共筛选出18株耐旱单株。对M_2代诱变株形态学分析发现，有叶面狭窄型和根长增长型两种突变类型。利用SCoT分子标记技术验证M_2代诱变株发现，筛选的5条SCoT标记引物对20份草坪草样品扩增后，多态性比率为84.09%。其中SCoT-35引物扩增产物条带最为清晰稳定，诱变株与野生型差异明显。M2代三叶期变异单株经干旱、高温胁迫处理后，丙二醛含量、脯氨酸含量及相对电导率呈升高趋势，叶绿素含量呈下降趋势。最终得到两株多年生黑麦草耐旱突变体A5和A8,1株高羊茅耐旱突变体B9；两株多年生黑麦草耐热突变体A8和B9,1株高羊茅耐旱耐热突变体B9。本研究结果为草坪草抗性品种选育提供了帮助。
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
符雨嫣 王昊德 孙辉 金春林 王海银
目的：分析与传统基因检测技术相比，二代测序法用于非小细胞肺癌突变基因检测的经济性。方法：对国际二代测序法用于非小细胞肺癌的经济学评价进行系统综述。从卫生体系视角出发，构建决策树模型，测算二代测序法（8基因突变联合检测）对比荧光实时定量PCR法（3基因突变联合检测）的成本-效果，并进行敏感性分析。结果：纳入4篇研究，其中2篇研究认为与传统基因检测技术相比，二代测序法用于非小细胞肺癌的突变基因检测具有一定的经济性，但仍需要结合具体情况进一步研究。模型研究结果表明，对比荧光实时定量PCR法（3基因突变联合检测），采用二代测序法（8基因突变联合检测），非小细胞肺癌患者多存活1年所需要增加的诊断成本为97 501.18元，以3倍人均GDP为阈值时，具有成本-效果。结论：二代测序法用于非小细胞肺癌突变基因检测具有一定经济性，但未来仍需要更新数据和结果。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王宏梅 赵心清
采用部分互补的引物扩增表达载体的全序列,通过DpnⅠ酶切PCR产物去除甲基化的模板DNA,利用大肠杆菌自身的酶系统环化质粒DNA,只需设计1对引物,进行1次PCR反应,就直接获得了突变的表达载体。利用该方法成功地对拟南芥的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶编码基因ATPK64进行了定点突变。这种改进的DNA定点突变方法,具有简便、快捷、经济、成功率高的特点,是值得推广的PCR定点突变方法。
关键词：
PCR 定点突变 部分互补引物 拟南芥
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
都二霞 赵惠燕 郭剑文
为了揭示紫外线诱导桃蚜的生态学及分子变异的遗传效应,以在正常环境中生长的桃蚜为对照,研究了紫外线不同辐射强度(15,30,45 W)和时间(2,6 h)对桃蚜(Myzus persicae)生态学参数以及线粒体基因COⅠ-Ⅱ突变的影响。结果表明,不同辐射处理对桃蚜F2代的主要种群参数均有不同程度的影响:当辐射时间为2 h时,紫外线强度为15 W处理的桃蚜种群内禀增长率最高,达0.265;当辐射时间为6 h时,内禀增长率随紫外线辐射强度的增加而缓慢上升。与对照相比,低强度(15 W)紫外线处理桃蚜的平均世代周期和净增殖率较其他处理明显增加。对紫外线诱导桃蚜线粒体基因COⅠ-Ⅱ进行测序可知,15 ...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
邓明俊 张彦明 梁荣 段明星
为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 NDV F基因的真核表达质粒载体 PC4 F的基因疫苗。
关键词：
鸡新城疫病毒 F基因 基因疫苗
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
可成友 吴晓芳 刘世强
寻找并鉴定玉米葡萄糖苷酶2(Glu2)新的突变类型。以单粒玉米自交系种子发芽5￣15d的幼苗为试材,提取葡萄糖苷酶进行电泳检测,对所发现的新的异型材料,提取正在表达高峰时期的RNA,并对其进行逆转录、克隆和测序。测序结果与发表过的Glu2的DNA序列相比较,发现有99.58%是相同的。将其翻译成氨基酸序列相比较,有99.64%是相同的。只不过是在第58个氨基酸由谷氨酰胺突变成谷氨酸;第212个氨基酸由谷氨酰胺突变成组氨酸。DNA序列分析是区别不同遗传性状以及新突变类型的根本方法,再加上氨基酸序列分析就能更进一步解释了造成遗传性状差异的根本原因。为深入研究性状变异和有目的的改良性状,起到积极的指...
关键词：
玉米葡萄糖苷酶 突变类型 DNA测序
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
白霞 李润成 余兴龙 丁建 黎满香
利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mErns基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)中未突变的Erns基因却不能表达,说明Erns基因的RNA...
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