为确定从江苏省农科院蔬菜所温室大棚所采集到的表现花叶、皱缩、明脉症状的绿豆植株是由何种病毒引起的,采取了透射电子显微镜观察、RT-PCR、序列测序以及酶联免疫吸附法(ELISA)等方法进行鉴定。结果表明,在透射电镜下可观察到风轮状、束状病毒内含体,与Potyvirus属病毒粒子形态一致;对所提取的病样总RNA使用Potyvirus通用引物进行RT-PCR扩增,得到由1 082个核苷酸组成的序列,包含编码228个氨基酸的完整cp基因,产物通过NCBI比对,发现和已报道的菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virus,BCMV)HB分离物同源性高达95%,初步判定该病原为菜豆普...

【目的】明确引起广西百色市辣椒呈现叶片上卷、皱缩等症状的病毒病原，并对各病毒分离物的遗传进化关系进行分析，旨在为辣椒病毒病的防控提供科学依据。【方法】从广西百色市采集4份疑似被菜豆金色花叶病毒属病毒感染的辣椒样品，利用PCR、分段克隆、核苷酸序列比对分析、进化树构建等方法对疑似样品进行鉴定及遗传进化分析。【结果】PCR结果显示，4个样品中均能扩增出约570bp目标PCR条带，将PCR产物直接送样测序，所得序列进行blastn分析发现，4条序列分别与已登录GenBank的TYLCV和PaLCuCNV各分离物的序列具有较高的核苷酸相似性，证实所采集的辣椒植株受到菜豆金色花叶病毒属病毒侵染。参考已登录GenBank的TYLCV（GenBank登录号:MG904859和KY783940）、PaLCuCNV（GenBank登录号:KU892661和MW779523）的序列设计2对背靠背引物，随机选择2份阳性样品进行全基因组扩增和序列测定，将所得PCR产物纯化后克隆至pMD18T载体上，挑选阳性克隆进行测序，从2份阳性样品中共获得3条病毒全长基因组序列，将所得序列在GenBank中进行Blastn分析，发现其中2条序列与已登录GenBank的部分TYLCV分离物的核苷酸相似性达到91%以上，1条序列与已登录GenBank的部分PaLCuCNV分离物核苷酸相似性在91%以上。根据双生病毒的分类标准，确定侵染广西辣椒的双生病毒为TYLCV和PaLCuCNV的不同分离物。进化树分析发现，TYLCV广西辣椒分离物BS66-1与TYLCVSG1分离物（GenBank登录号为：MT969010，寄主为番茄）具有较近的亲缘关系，而TYLCV广西辣椒分离物BS67-1则与TYLCV GX和TYLCV BS3分离物（GenBank登录号为：MW389934、MT375610，寄主均为番茄）具有较近的亲缘关系；PaLCuCNV广西辣椒分离物BS66-2则与PaLCuCNV GX01分离物（GenBank登录号：MW779523，寄主为番茄）具有较近的亲缘关系。【结论】侵染广西辣椒呈现叶片上卷、皱缩等症状的病原为TYLCV和PaLCuCNV，本研究为菜豆金色花叶病毒属病毒侵染广西辣椒的首次报道。

采用大豆病、健株正反交和病、健株自交的方法，以间接ＥＬＩＳＡ检测其后代种胚的带毒率。试验结果表明：♀（Ｓ）×（Ｓ）、♀（Ｓ）×（Ｈ）两组合子代的种胚带毒率较高，在结荚初期均超过６０％；♀（Ｈ）×（Ｓ）子代种胚带毒率较低，仅２５％左右；在健株自交组合中未检测到病毒。说明胚珠在发育早期受到病毒的侵染可能是种子带毒的主要因素，而带毒的花粉使种胚受到病毒侵染的作用较小。对大豆花前期病、健株子房组织进行免疫胶体金扫描及超薄切片观察的结果也证实，胚珠在受粉之前就已受到大豆花叶病毒的侵染

感染大豆花叶病毒（ＳＭＶ）的大豆在发病初期其叶片除还原糖以外，其它各类碳水化合物含量均下降，包括总糖，总可溶性糖、不溶性糖、非还原性糖、但总可溶性蛋白、总游离氨基酸均明显增加．这说明ＳＭＶ侵染明显地抑制了寄主碳水化合物代谢，但促进了寄主氮化合物代谢．因此ＳＭＶ侵染大豆后，在消耗碳水化合物的基础上，优先合成各类蛋白质、这有利于ＳＭＶ的复制．另外在感染ＳＭＶ的大豆中，还发现总氮量增加，这说明ＳＭＶ浸染刺激了寄主对氮的吸收并直接合成各种氨基酸，而有利于病毒的增殖．另一方面由于病毒的增殖不破坏寄主本身的蛋白质，所以氮吸收的增加对寄主起到一种保护作用。

【目的】鉴定福建果园西番莲上的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,Te MV),并建立用于该病毒特异性检测的分子快速检测方法,为该病毒的防治提供参考依据。【方法】采用血清学检测、电镜观察、通用简并引物RT-PCR、特异性引物RT-PCR对福建西番莲样品进行病毒检测,并对阳性样品的PCR产物进行克隆、测序;根据已报道的夜来香花叶病毒基因序列和本研究的序列测定结果,设计一对用于扩增Te MV外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长的特异性引物,通过反应条件优化,建立该病毒的特异

1990年夏季,在甘肃省春蚕豆区采集到蚕豆病毒病标样30余份,经单斑分离得到3个病毒分离物,接种8科24种植物,只侵染豆科和藜科的8种植物。它们都能通过桃蚜和豆蚜以非持久性方式传播。体外失毒温度55～60℃,稀释限点10~(-3)～10~(-4),体外存活期(20～30℃)1～2d.病毒粒体均为线形,750nm×15nm.血清学试验结果表明,都能与菜豆黄花叶病毒的抗血清发生阳性反应.根据以上特性,将G17,G12和 G8三个分离物鉴定为菜豆黄花叶病毒(BYMV)。

研究了对ＳＭＶ抗性不同的３个大豆品种在接种ＳＭＶ－ａ株系后叶片过氧化物酶活性及其同功酶的动态变化。结果表明，侵染的早期（接种后３ｄ），抗病品种科丰１号的过氧化物酶活性急剧上升，出现了新的ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶；感病品种徐豆１号和１１３８－２的变化则相对较小。侵染的中后期（接种后６ｄ和９ｄ），感病品种的过氧化物酶活性迅速上升，且徐豆１号也出现了ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶；抗病品种过氧化物酶活性略有下降，ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶消失。ＳＭＶ侵染早期，抗病品种过氧化物酶活性的急剧增加以及ＰＩ为４．４０和９．７３的同功酶的出现可能与抗病性密切相关。

【目的】鉴定黄淮地区大豆花叶病毒株系,明确该地区目前SMV株系的组成、分布和流行情况。【方法】2001～2002年采集了黄淮地区四省28个县市的大豆病样591份,经初步繁殖鉴定、生物纯化及组织印迹检测,得到了50个SMV毒株,采用王修强等筛选的10个鉴别寄主进行接种鉴定。【结果】检测到SC-3～SC-9等7个株系群,发现1个新的株系群SC-10。综合本单位1998～2002年的结果,黄淮地区(河南、山东、安徽北、江苏北)在SC-1～SC-10中,除SC-2未发现外,9个株系群中,以SC-3和SC-7为主,分别占29.21%和23.60%,SC-4和SC-8其次,占10.11%和8.99%。按省...

【目的】针对进境大豆种子上症状相似的菜豆荚斑驳病毒（Ｂｅａｎ ｐｏｄ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ，Ｂｐｍｖ）和大豆花叶病毒（ｓｏｙＢｅａｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，ｓｍｖ），建立同时快速检测２种病毒的多重ｒｔ－ｐｃｒ技术。【方法】根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的Ｂｐｍｖ、ｓｍｖ外壳蛋白基因序列，设计２对特异性引物，以复合感染Ｂｐｍｖ、ｓｍｖ的大豆种子为材料，提取ｄｓｒｎａ作为模板进行多重ｒｔ－ｐｃｒ的引物浓度、退火温度和循环数的优化。利用优化建立的多重ｒｔ－ｐｃｒ方法分别对健康大豆种子、Ｂｐｍｖ、ｓｍｖ及２种病毒复合感染的大豆种子进行检测，测定该方法的特异性。利用健康大豆种子提取的ｄｓｒｎａ，将从复合．．．

为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)在室内条件下复合侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana)的发病流行因素，以接种磷酸缓冲盐溶液(PBS)的本氏烟为对照，通过对AMV和WCMV单独接种侵染、复合侵染的不同接种浓度、不同温度和相对湿度(RH)对本氏烟发病的影响及本氏烟中两种病毒含量变化进行了研究。结果表明最适合本氏烟发病的AMV和WCMV单独接种浓度分别为20%(AMV:PBS=1:4)和50%(WCMV:PBS=1:1)，两种病毒复合侵染接种的浓度为75%和25%(AMV:WCMV=3:1)；最适宜发病的温度为25℃、RH为60%，在此条件下，AMV和WCMV复合接种侵染本氏烟的平均病情指数为80.12，比单独接种AMV、WCMV的病情指数分别提高了22.36%、45.28%，其病毒含量是两种病毒单独接种本氏烟中的2.11和1.60倍。综上可见，当温度为25℃、RH为60%以及AMV和WCMV复合侵染接种浓度为75%和25%时，本氏烟发病最严重。

根据已报道的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白(CP)基因序列合成1对引物,对侵染辣椒的黄瓜花叶病毒湖北分离物的病毒外壳蛋白基因进行基因扩增和序列分析。结果表明:湖北省内不同辣椒主产区采集到的样品CP基因之间的核苷酸同源率高达98.2%~99.2%,与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为92.1%~96.5%和72.1%~78.1%,并且和亚组Ⅰ中的IB系列株系同源率更高。由此确认这4个CMV分离物属于亚组Ⅰ中的ⅠB成员。

【目的】病毒病是萝卜（Raphanus sativus）生产上的主要病害之一，严重危害萝卜生产安全及产业发展。本研究旨在鉴定侵染广东萝卜的病毒种类，探究侵染萝卜的油菜花叶病毒（youcai mosaic virus,YoMV）分子特征及致病性，为萝卜病毒病的防控提供科学依据。【方法】从广东省惠州市萝卜种植基地采集了3个疑似病毒病侵染的萝卜病样及1个无症状样品，提取样品总RNA，利用小RNA深度测序初步探明病毒种类，然后根据测序结果设计病毒特异引物进行RT-PCR验证。应用分段克隆方法扩增病原病毒YoMV基因组1—3 405 nt片段和3 194—6 304 nt片段，然后通过同源重组克隆到p CB301双元载体上，得到YoMV-GD分离物基因组全长序列，同时构建该病毒分离物的侵染性克隆。利用MEGA7软件对YoMV-GD及其他分离物全长核苷酸序列进行系统进化分析。通过侵染性克隆人工注射接种本生烟和普通烟，检验pCB301-YoMV-GD的侵染性，然后再注射接种萝卜和菜心，测定YoMV-GD分离物的致病性。【结果】侵染广东萝卜的病毒包含萝卜隐状病毒3(Raphanus sativus cryptic virus 3,RsCV3)、萝卜黄病毒1(Raphanus sativus chrysovirus 1,RasCV1)、芜菁花叶病毒（turnip mosaic virus,TuMV）、YoMV 4种；YoMV-GD分离物全长序列为6 304 nt，编码4个蛋白，分别为124.7 kD复制相关蛋白、183 kD复制酶、30 kD运动蛋白MP、17.7 kD外壳蛋白CP，与YoMV英国分离物（GenBank登录号：AY318866）核苷酸相似性最高，为99.18%;YoMV-GD分离物与英国、德国及我国上海、重庆分离物的亲缘关系较近；构建的侵染性克隆pCB301-YoMV-GD可以系统侵染本生烟和普通烟，引起严重的坏死、枯斑等症状，具有较强的侵染性；YoMV-GD可以系统侵染萝卜和菜心，引起轻微的黄化和花叶等症状，致病力较弱。【结论】侵染广东萝卜的病毒包含RsCV3、RasCV1、TuMV和YoMV，且以复合侵染形式存在；YoMV遗传进化并没有明显的地域性；YoMV-GD对烟草致病力较强，而对萝卜和菜心致病力较弱。

通过大量的接种实验,分析了影响病毒接种效率的各种因素,经ELISA和RT PCR方法进行检测,确立了较为稳定有效的小麦黄花叶病毒机械传毒体系。采用新鲜病叶或用氯化钙干燥保存的病叶作为接种毒源,在0 2mol·L-1磷酸缓冲液中研磨后,对低温下(11～13℃)培养的小麦幼苗(1～2叶龄)进行叶面接种,并将接种后的小麦低温培养可获得较高的接种效率(12 57%～13 43%)。对毒源类型、小麦苗龄和接种部位等其他可能影响接种效率的因素进行了测定。

【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是我国重要的检疫性植物病毒，对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫，参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著下调寄主转录因子Nb ERF RAP2-1的表达。【目的】明确ERF转录因子家族成员在CGMMV侵染过程中的作用，为CGMMV病害防治提供理论依据。【方法】运用MEGA7.0构建系统进化树，对基于Nb ERF RAP2-1蛋白的氨基酸序列进行系统进化分析；构建Nb ERF RAP2-1的荧光表达载体，并观察其亚细胞定位；利用q RT-PCR技术分析Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染不同时期的表达量；通过烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默（VIGS）和瞬时过表达Nb ERF RAP2-1分析其在CGMMV侵染过程中的作用。【结果】系统进化树分析表明，Nb ERF RAP2-1与多种烟草的ERF转录因子同源性极高，与拟南芥的ERF转录因子亲缘关系较远；亚细胞定位结果显示Nb ERF RAP2-1定位于细胞核，作为转录因子行驶功能；CGMMV侵染对本氏烟内源基因Nb ERF RAP2-1的转录水平影响结果显示，在CGMMV侵染6、9、12 d时Nb ERF RAP2-1的表达量无明显变化，在CGMMV侵染15和18 d时Nb ERF RAP2-1表达量显著下调；TRV介导的VIGS可以将植物内源基因Nb ERF RAP2-1有效沉默，在沉默的植株系统叶上接种CGMMV,8 d对照植株系统叶出现斑驳、卷曲症状而Nb ERF RAP2-1沉默植株无症状，同时CGMMV RNA水平和蛋白水平检测结果也表明TRV:Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV的积累；同样，分别在本氏烟叶片瞬时过表达Nb ERF RAP2-1 24、48和72 h时检测CGMMV RNA水平和蛋白水平表达量，结果显示在病毒侵染早期，即复制阶段就抑制CGMMV的表达。【结论】Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV侵染初期病毒复制，即病毒RNA复制阶段；随着CGMMV不断侵染，在CGMMV细胞间运动和系统运动时期，CGMMV识别防御相关基因Nb ERF RAP2-1并抑制该基因的转录；当Nb ERF RAP2-1缺失后可能抑制了下游蛋白的转录或表达，从而抑制病毒侵染后期的积累。由此可见，Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。

【目的】黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是侵染瓜类作物的主要病毒之一,对瓜类产业造成巨大的危害。本研究旨在探明侵染广东省连州市葫芦的CGMMV分离物(CGMMV-GDLZ)分子特征及其在系统进化中的地位,并测定其对黄瓜、葫芦和西瓜的致病性,为CGMMV的防控提供理论依据。【方法】从广东省连州市葫芦种植基地采集2个疑似CGMMV侵染的病样以及1个无症状样品,提取总RNA,根据CGMMV参考序列(GenBank登录号:KX883801)设计引物进行RT-PCR检测,引物序列为F:CCACGAGTTGTTTCCTAATGCTG/R:TTTGCTAGGCGTGATCGGATTGT,退火温度53℃,扩增长度890 bp。将CGMMV全长序列分为前后两段,前半段1—3 511 nt,扩增引物序列为F:AAGTTCATTTCATTTGGAGAGGGTTTTAATTTTTATAA TTAAACAAA/R:AGTTCTGCATTAATTGCTATTTGGTAGGCACAGTGGTAG;后半段3 301—6 423 nt,扩增引物序列为F:GTGCGTGCTACCCCGACTCCAATAGGTTTGATTGCCCGTG/R:GGTGGAGATGCCATGCCGACCCTGGGCCCCTACCCGGGGAAAGG。将前后两段PCR产物通过同源重组的方法克隆到pCB301双元载体上,测序得到CGMMV-GDLZ分离物全长序列。利用CGMMV-GDLZ分离物全长序列在NCBI中进行Blast分析,然后通过MEGA7软件对CGMMV-GDLZ以及其他已经报道的CGMMV分离物进行系统进化树分析。将构建好的pCB301-CGMMV侵染性克隆注射接种本生烟验证其侵染性,然后再注射接种黄瓜、葫芦和西瓜的子叶,测定CGMMV-GDLZ分离物的致病性。【结果】RT-PCR结果证实,广东省连州市葫芦病样感染了CGMMV。CGMMV-GDLZ分离物全长序列为6 423 nt,编码4个蛋白,分别为129K复制酶(61—3 495 nt)、186K复制相关蛋白(61—5 007 nt)、运动蛋白MP(4 994—5 788 nt)和外壳蛋白CP(5 763—6 248 nt)。CGMMV-GDLZ核苷酸序列与CGMMV-eWT分离物(GenBank登录号:KY753928)同源性最高,为99.97%。系统进化树分析结果显示,CGMMV-GDLZ分离物与日本、韩国等东亚CGMMV分离物同属Group 1,在遗传距离上与山东、浙江和河南的CGMMV分离物最接近。pCB301-CGMMV侵染性克隆可以系统侵染本生烟,造成本生烟上部叶片出现皱缩、斑驳、凸起等症状,RT-PCR和Western blot进一步确认了侵染性克隆的侵染性。注射接种CGMMV-GDLZ分离物后15 dpi,葫芦和西瓜即可产生斑驳、花叶、突起、生长迟缓等症状,24 dpi时症状更明显。而15 dpi时,CGMMV-GDLZ分离物在黄瓜上的症状不明显,与未接种对照植株几乎没有区别;将植株从控温接种室移入网室中,30 dpi时,黄瓜植株上部叶片开始出现斑驳和花叶,40 dpi时,症状已经非常明显。RT-PCR和Western blot检测进一步确认了上述结果。【结论】侵染广东省连州市葫芦的CGMMV-GDLZ分离物与山东、浙江和河南的CGMMV分离物很可能具有相同的传染源;CGMMV-GDLZ分离物可以侵染本生烟、黄瓜、葫芦和西瓜等作物,但对这些作物的致病性存在差异。