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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李维平 赵文明 雷萍
为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。
关键词：
DNA 提取方法 植物组织
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘芬 于秀梅 刘大群
为验证NaAc/无水乙醇沉淀法提取植物总RNA的质量,本研究对小麦不同组织及其他不同种属植物花的总RNA进行提取和检验,结果表明,该方法提取的植物总RNA完整性好、纯度高。以Tubulin为参照对其余4个持家基因GAPDH、Actin、Rubisco和Ubiquitin的表达情况进行分析。扩增结果表明,选定的各持家基因在叶锈菌侵染不同时间的小麦叶片中的表达量并不一致,且各基因在小麦叶片中的丰度也存在差异。通过对几种基因的扩增,进一步证实该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物总RNA提取方法。
[期刊] 华北农学报
[作者]
任杰 徐秀红 张素丽 冷平
为了提高植物不同组织提取质量和效率,降低成本,在热硼酸法的基础上探索出一种适于植物不同组织总RNA提取方法。利用该方法从植物根、茎、叶、不同成熟期果实、不同成熟期种子和不同成熟期果柄中提取的总RNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性。所得RNA的A260/A230大于2.3,A260/A280为1.8～2.0,并且RNA产量高,可以满足RT-PCR和Real time RT-PCR的实验需要。该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物不同组织总RNA提取方法。
关键词：
植物组织 总RNA 热硼酸法
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周倩 李兰芝 朱宏建 高必达
改进DNA提取方法,利用含2%CTAB、1%SDS、2%PVP、100mmol/LTris-Cl(pH8.0)、20mmol/LEDTA(pH8.0)和1.4mol/LNaCl的DNA提取缓冲液,提取了不同种属12种植物的DNA,并对其进行了PCR检测.结果显示,所提取的DNA符合PCR试验要求,用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带.该方法无需酚仿抽提,简单、高效、环保,特别适合大规模植物DNA的提取.
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
冯典兴 刘广纯
以蛆症异蚤蝇为试材,提出一种盐酸胍结合NaCl的DNA快速提取新方法,并用随机引物对提取的DNA进行扩增。结果表明:该方法可以快速提取蚤绳幼虫、蛹、成虫及乙醇浸泡成虫的DNA。RAPD结果显示,该法提取的DNA能够满足蚤蝇分子生物学研究的需要。
关键词：
蚤绳 盐酸胍 基因组DNA
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王玲玲 叶青雷 王学英 石生林 李群 尹迎礼
为了获取高质量的栎属植物基因组DNA,采用经过改良的SDS法和CTAB法对几种常见栎属植物进行基因组DNA的提取。结果表明:改进的SDS法和CTAB法都较常规的方法好,所提出的DNA较纯净。改进的CTAB法与改进的SDS法比较,改进的CTAB效果较好,所获得的DNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,纯度较高,OD260/OD280为1.75～1.80,运用SSR和RAPD进行分析时,可以获得较好的扩增片段,说明蛋白质、多糖、RNA等去除较干净。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘昔辉 宋焕忠 张革民 张荣华 方位宽 区惠平 陆建勋 梁强 唐红琴
利用珠磨器和不锈钢珠,以甘蔗及其近缘属割手密、斑茅和河八王为材料提取基因组DNA,并对得到的DNA进行电泳检测、含量测定和SSR分析。结果表明,该方法能高效快速提取基因组DNA,所提取DNA中蛋白质、多糖类物质等去除较彻底,DNA纯度较高,完整性好;SSR分析条带清晰,多态性较丰富,能扩增出特异性谱带。该方法无需液氮研磨,简单、快速、高效,经济成本低、PCR扩增效果好,适用于大规模的样品检测,可用于甘蔗育种遗传多样性分析、种质鉴定及指纹图谱构建等。
关键词：
甘蔗 DNA提取 SSR
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
高玉峰 张攀 郝晓敏 严建兵 李建生 杨小红
快速高效的DNA提取方法是玉米大规模分子育种的第一步,因此,需要发展一种快速提取玉米基因组DNA的方法,以满足我国中小型实验室的需要。本研究介绍了一种可用于玉米大规模基因组DNA提取的方法:先利用改良碱煮法提取玉米籽粒小块胚乳的DNA,进行基因型鉴定,对大群体进行筛选,再利用电钻磨样及简化的CTAB法快速提取玉米苗期叶片的DNA,进行后期的研究。这种方法使得玉米大群体的筛选和研究简单化、快速化、常规化,可广泛应用于玉米分子育种。
关键词：
玉米 大群体 胚乳 碱煮法 快速提取
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
马蕾蕾 徐世昌 曹远银
本研究提出了一种提取植物种子DNA的快速、简便、有效的新方法。基本过程包括选取饱满植物种子3～5粒并研成细粉,用提取缓冲液提取、离心分离、异丙醇沉淀、TE缓冲液保存得到的DNA。结果表明:所获得的DNA浓度和质量均较高,经扩增与琼脂糖凝胶电泳后得到了非常清晰的DNA谱带,特别适合序列特征扩增区段(Sequence-CharacterizeAmplifiedRegion,SCAR)检测。
关键词：
快速DNA提取 植物种子 SCAR检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程红梅 彭于发 金芜军 贾士荣
【目的】DNA的提取是GMO(Genetically modified organism)作物检测中重要步骤,DNA的质量关系到GMO检测的成败。【方法】本研究以大豆油为材料,探索出一种快速、简便的提取大豆油DNA的方法。【结果】该方法能从10ml大豆油中提取0.4μg高纯度DNA,可用于PCR检测。提取市场上出售的十几种精练大豆油的DNA,针对35S、Nos、EPSPS和Lectin基因进行了PCR检测,分别扩增出不同的目的片段。【结论】大豆油中有残存的DNA碎片,在转基因大豆油中能扩增出外源基因的片段。本研究为大豆油的外源基因的检测提供了可行方法。
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷开荣 石春焱 李明顺 李晓辉 李新海
在玉米分子标记辅助育种工作中,需要对大量群体的个体样本进行分子标记分析,其中DNA的高效快速提取是关键的技术环节。以异硫氰酸胍为主要提取试剂,结合使用组织研磨器(Qiagen Tissuelyser),建立了一种玉米叶片基因组DNA的快速提取新方法。利用此方法提取玉米叶片基因组DNA,具有使用药品少、操作步骤简单、快速、成本低、DNA质量稳定等优点,通常情况下每人每个工作日可以提取300个DNA样品。此DNA提取方法可有效地用于玉米分子标记分析。
关键词：
玉米 DNA提取 异硫氰酸胍 分子标记
[期刊] 林业科学
[作者]
苟大平 王曦茁 汪来发 田国忠 朱天辉 郭民伟
【目的】本研究旨在探索快速、简便地直接从病木中提取松材线虫DNA的方法。【方法】运用Chelex-100结合异硫氰酸胍蛋白变性缓冲液建立新的高效快速提取微量木块中线虫DNA的方法,并通过普通PCR与环介导等温扩增(LAMP)对提取的DNA进行检测验证。【结果】建立了提取线虫DNA的新方法 Chelex-100法,并对影响提取效率的Chelex-100浓度、冻融时间和煮沸时间进行了优化。Chelex-100法最适Chelex-100终浓度为1.5%(W/V),最适冻融时间为5 min,最适煮沸时间为8 min。与传统的CTAB法和蛋白酶K法比较,Chelex-100法提取的DNA得率高,相同条件...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
梁玉琴 李芳东 傅建敏 乌云塔娜 吴硕
针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
傅建敏 梁玉琴 孙鹏 姬燕晓 谭晓风
利用Percoll密度梯度离心法,对4种柿属植物君迁子D.lotus L.、油柿D.oleifera Cheng、浙江柿D.glaucifolia Metc.、金枣柿D.kaki spp.进行叶绿体DNA(cp DNA)提取方法的优化,结果显示优化后的柿属植物cp DNA提取方法具有高效、简便、重复性好、稳定性高的特点;经检验,利用此方法提取的cp DNA质量好,浓度与纯度均较高,能够满足后续叶绿体PCR扩增、基因组测序等分子生物学试验。
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