从30日龄商品肉鸡腺胃分离到一株具有血凝特点的病毒,经HI交叉抑制试验证实为H9N2病毒,命名A/Chicken/Shandong/KD/09,病毒对SPF鸡无致病性,IVPI为0。对其HA基因进行克隆测序,HA基因氨基酸裂解位点的基序为RSSR↓GL,与弱毒基序一致。A/chicken/Shandong/KD/09分离毒株与参考株HA基因的核苷酸之间的同源性为94.5%～100%,氨基酸序列之间的同源性为95.5%～99.8%。与国外A/ck/Korea/ms96/96、A/Parakeet/chiba/1/97和A/turkey/Wisconsin/1/1966 HA基因核苷酸序列同源性为...

从产蛋率下降的蛋鸡群中分离到1株具有血凝性的病毒,经HI交叉抑制试验证实为H9N2病毒,命名为A/Chicken/Shandong/JN/11,病毒对SPF鸡基本无致病性,IVPI为0。对其HA基因进行克隆测序,HA基因裂解位点的序列为RSSR↓GL,与弱毒基序一致;有7个潜在糖基化位点;受体结合位点除198位有变异外,其余均较保守;A/Chicken/Shandong/JN/11分离株分GenBank上发表的近几年来山东参考株HA基因的核苷酸之间的同源性为89.9%~97.4%,氨基酸序列之间的同源性为93.4%~97.5%。系统进化树分析表明,该毒株与近年来国内流行的A/Chicken/z...

从抗体水平较高、产蛋下降的种鸡群分离到一株具有血凝特点的病毒,经HI交叉抑制试验证实为H9N2病毒,命名A/Chicken/Shandong/LY/08,病毒对SPF鸡无致病性,IVPI为0。对其HA基因进行克隆测序,HA基因氨基酸裂解位点的基序为RSSR↓GL,与弱毒基序一致。A/chicken/Shandong/LY/08分离毒株与GenBank上发表的山东参考株HA基因的核苷酸之间的同源性为95.2%～99.6%,氨基酸序列之间的同源性为95.4%～99.5%。与国外A/ck/Korea/ms96/96、A/Parakeet/chiba/1/97和A/turkey/Wisconsin/1...

【目的】了解广西H9N2亚型猪源流感病毒的分子流行病学特征并揭示其遗传变化规律,为有效防控猪流感提供参考依据。【方法】运用PCR方法扩增广西2株H9N2亚型猪源流感病毒(A/swine/Guangxi/P2/2011和A/swine/Guangxi/P3/2011)的HA基因,并进行克隆测序及序列比对分析,绘制遗传进化树。【结果】2株H9N2亚型猪流感分离株的HA基因全长1701 bp,开放阅读框(ORF)全长1683 bp,编码560个氨基酸;与参考毒株核苷酸的同源性在83.7%～98.3%,推导氨基酸同源性在86.6%～98.2%。遗传进化树分析结果显示,2株分离株与A/Duck/HongKong/Y280/97病毒同属欧亚谱系的Y280亚系,其HA基因的裂解位点序列均为RSSR↓GLF,具有低致病性流感病毒的分子生物学特征;共有8个糖基化位点,其中6个位于HAl区,2个位于HA2区;HA受体结合位点均具有人流感病毒和猪流感病毒特征。【结论】分离获得的广西2株H9N2亚型猪源流感病毒A/Swine/Guangxi/P2/2011和A/Swine/Guangxi/P3/2011,其HA基因属于欧亚普系的Y280亚系,均具备典型的低致病性和与人流感受体结合特征。

利用RT-PCR技术克隆了10株涵盖不同分离年代和不同毒力的H9N2亚型AIV的NA基因,序列分析表明,10株AIV的NA基因的核苷酸和推导的氨基酸同源性高,进化稳定。系统进化树分析表明,其NA基因都属欧亚大陆禽分支,H9N2流感病毒的分布与地域有相关性。其NA蛋白氨基酸序列潜在的糖基化位点以及氨基酸红细胞吸附位点出现的变化尚不能解释这些毒株生物学特性上的差别。但这些研究结果从理论上丰富了H9N2亚型禽流感的分子流行病学,也为进一步研究该类毒株的进化提供了依据。

为了解湖北鸡源禽流感病毒的遗传进化和氨基酸变异情况,将分离到的2株禽流感病毒进行全基因组测序及遗传进化分析。利用RT-PCR扩增流感病毒基因组片段,PCR扩增流感病毒片段、克隆至pMD18-T载体,并对序列特征进行生物信息学分析。结果表明:分离到的2株病毒高度同源,其HA和NA基因属于Y280谱系,PB1、PA、NP和NS基因属于SHF98-like谱系,PB2和M基因属于G1-like谱系;HA裂解位点均为-RSSR↓GLF-,具有低致病性流感病毒的分子特征;在HA蛋白上比当前流行株Y280多了一个潜在糖基化位点313(NCS);在234位点(对应H3编号中的226)产生了从Q到L的突变;在M2蛋白的31位点均产生了从S到N的突变。该2株H9N2亚型流感病毒为Y280谱系的病毒,这提示湖北地区可能也流行Y280-like分支禽流感病毒,虽然属于低致病性禽流感病毒(Low pathogenic AIV,LPAIV),但具有感染哺乳动物的潜在风险。

为了阐明新疆油鸡H9亚型流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势,本研究采用RT-PCR技术对新疆油鸡分离株A/Chicken/Xinjiang Baicheng/1/2014(H9 N2)的PB1基因进行了克隆、测序及分子进化分析,将PB1基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列与Genbank中已经公布的参考序列进行同源性比较。结果表明,新疆油鸡分离株的PB1基因由2274个碱基组成,编码757个氨基酸,与AIV A/chicken/Henan/89/2013(H7N9)的PB1基因处于同一分支,其核苷酸和氨

【目的】从分子生物学角度了解Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序，应用Ｍｅｇａ ５软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感毒株Ｈａ裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低致病性病毒。１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒Ｈａ、Ｎａ基因进化比较同步，均处于ＤＫ／ＨＫ／Ｙ２８０／９７分支，而６个内部基因（Ｍ、ＰＢ２、ＰＢ１、Ｐａ、Ｎａ、ＮＳ）与高致病性禽流感Ｈ５亚型毒株呈现不同程度重组现象，且与Ｈ７Ｎ９亚型毒株基因的核苷酸同源性很高，很有可能为其提供内部．．．

对国内1998-2011年流行的22株H9N2分离株进行病原鉴定和HA基因的序列测定,结合在GenBank中公开的46株国内外H9N2病毒进行序列比对,绘制系统发育树。选取在时间、地点和遗传进化方面具有代表性意义的6株H9N2毒株,分别制备单因子血清,进行鸡胚交叉中和试验,计算不同毒株之间的鸡胚交叉中和指数,确定H9N2不同毒株之间的抗原相关系数,并与其HA基因氨基酸的同源性进行相关比较。以期在分子水平上探讨我国疫苗免疫压力下H9N2禽流感病毒的变异,研究病毒的抗原性变化,探讨HA基因变异对抗原性的影响。结果表明:鸡胚中和指数与HA氨基酸同源性呈显著相关(P

【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现...

【目的】我国批准使用的H9亚型禽流感（avian influenza,AI）商品化灭活疫苗种类繁多，其免疫效果和选用受到养殖者的广泛关注。通过评估不同商品疫苗对我国近期H9N2亚型AIV的免疫保护效果，以期为H9亚型AIV的免疫防控提供科学参考。【方法】依据国家兽药基础数据库疫苗批签发数据，从在售的40种H9亚型AI商品疫苗中选择批签发数量较多的4种疫苗（A—D疫苗），进行免疫攻毒试验。4株h9.4.2.5分支的H9N2亚型分离株CK/XJ/S1204/2015、DK/JX/S4512/2017、CK/YN/S1666/2020和CK/NX/S4590/2020为攻毒毒株，分别测定4株病毒的鸡胚半数感染量（EID_(50)）、鸡半数感染量（CID_(50)）和细胞半数感染量（TCID_(50)），以确定动物试验的攻毒剂量和细胞试验的感染剂量。每种疫苗以产品推荐剂量免疫3周龄SPF鸡各40只，同时设同日龄SPF鸡40只接种PBS作为对照组；免疫3周时，采集所有试验鸡血清，测定血凝抑制抗体（HI）和中和抗体（NT）滴度；同时将每种商品疫苗接种40只SPF鸡进行随机分组，每组10只，连同10只对照组鸡，以10 CID_(50)的剂量鼻腔感染H9N2亚型分离株，分别进行商品疫苗对4株病毒的攻毒保护试验。采集攻毒后3、5 d喉头及泄殖腔棉拭子样品，接种10日龄鸡胚检测排毒情况，统计疫苗保护率，比较疫苗对H9N2亚型分离株的免疫保护效果。【结果】4株H9N2亚型分离株的CID_(50)依次为10~(3.5)、10~(2.5)、10~(2.5)和10~(3.5) EID_(50)/0.1 mL。商品疫苗接种后3周，各免疫组SPF鸡血清中针对商品化H9亚型HI试验抗原（CK/SH/10/2001）的HI抗体均在9.4 log_2—11 log_2之间，但针对攻毒株的HI抗体平均效价在4.6 log_2—10.8 log_2之间，不同疫苗免疫组间存在较大差异，最大差异为64倍，各免疫组NT抗体平均效价在6.7 log_2—12.2 log_2之间，最大差异为32倍，对照组鸡的HI抗体和NT抗体均为阴性。以滴鼻方式感染不同H9病毒后，4种疫苗的免疫保护效果存在较大差别，在攻击CK/XJ/S1204/2015毒株的试验中，3种疫苗（B—D疫苗）能为免疫鸡提供80%以上保护；在攻击DK/JX/S4512/2017毒株试验中，仅1种疫苗（B疫苗）能为免疫鸡提供80%以上保护；在攻击CK/YN/S1666/2020毒株的试验中，2种疫苗（A和B疫苗）能为免疫鸡提供80%以上免疫保护；而攻击CK/NX/S4590/2020毒株，4种疫苗免疫鸡的保护率均低于80%，而同期各对照组鸡均排毒，排毒率均高于80%。【结论】不同商品疫苗预防近期H9亚型分离株感染的免疫保护效果存在较大差异，疫苗抗原与分离株之间的抗原性差异是免疫保护率降低的主要原因；使用H9N2亚型流行毒株测定免疫后的HI抗体和NT抗体可作为评价商品疫苗免疫保护效果的重要依据。本研究为商品H9疫苗的科学选用提供重要参考。

［目的］本文旨在了解Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒神经氨酸酶（ＮＡ）基因的遗传特点和变异情况。［方法］选择２００８—２０１３年从江苏、安徽和浙江省家禽中分离的１１株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒，用ＲＴ－ＰＣＲ方法对ＮＡ基因片段进行扩增、克隆和序列测定，并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性及遗传进化分析。［结果］１１株毒株的ＮＡ基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为８６．２％～９９．５％和８６．９％～９９．１％，均属于欧亚分支。其中９株鸡源毒株属于Ｙ２８０－ｌｉｋｅ亚系，在ＮＡ蛋白颈部６３～６５位点缺失了３个氨基酸；２株鸭源毒株属于Ｇ１－ｌｉｋｅ亚系，在颈部３９～４０位点缺失了２个氨基酸。１１株分离株除．．．

应用ST细胞,从临床上表现为腹泻症状的病死仔猪肠内容物中分离得到一株病毒,并对该病毒进行RTPCR,直接免疫荧光与动物回归等试验,证实该病毒为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),命名为JS2012株。应用PCR方法克隆出其初代(P1TS)与50代(P50TS)的S基因片段,进行序列测定,并将该基因序列与已发表的18个不同来源的TGEV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸同源性为96.0%～99.9%,氨基酸的同源性为96.5%～99.9%。TGEVJS201PITS株与中国江苏省HN2002株和美国Miller M6亲缘较近,表明不同地区分离毒株的S基因差异不大,而与P1T...

为了发挥微生物和植物在重金属矿尾区铜污染土壤的共同修复作用,本研究从陕西省凤县矿尾区天蓝苜蓿根瘤中筛选分离到一株抗重金属铜的菌株,定名为CCNWSX0020。该菌株在YMA琼脂平板上抗铜浓度为3.0mmol/L,TY液体培养基中抗铜浓度为1.4 mmol/L,因此,它是研究根瘤菌抗铜机制的良好菌株。该菌株经生理生化分析、G+C mol%测定、DNA同源性分析及16S rDNA序列相似性比较,鉴定为苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium melilo-ti),它与苜蓿中华根瘤菌LMG6133的菌株(GenBank登录号为X67222)相似性为99.7%。由于根瘤菌具有独特的生物学地位,即能够...

随机挑选湖南某规模化猪场出现“抖抖病”的新生仔猪，采集血清样本，用可扩增猪非典型瘟病毒(APPV)NS5B基因和E2基因引物进行RT–PCR鉴定，对PCR扩增产物测序，结果发病仔猪被鉴定为APPV感染阳性。随后利用MegAlign软件分析NS5B基因序列的同源性和E2蛋白结构，并使用 MEGA 5.0 采用邻接法构建其遗传进化树。NS5B基因序列分析表明，鉴定毒株HN0626与GenBank中84株参考毒株的同源性为81.68% ～98.95%；分析预测E2蛋白结构，推导其潜在的B细胞抗原表位。系统发育分析显示，HN0626毒株属于基因1型，是全球猪群中的主要流行毒株，其E2、NS5B基因序列上传至GenBank，登录号分别为OR936135、OR936136。