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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈明勇 陈德威 曾群辉
从西藏地区腹泻死亡牦牛中分离出一株肠毒素型大肠杆菌。该菌在形态特征、培养特性和生化特性方面与大肠杆菌基本一致。血清学试验表明 ,该菌的O抗原属O148,K88、K99、987P单因子血清均不能凝集本菌。在MSHA反应中 ,本菌能凝集绵羊、豚鼠、马、鸡的红细胞 ,而K88、K99、987P抗血清均不能抑制其对绵羊、豚鼠、马、鸡红细胞的凝集。腹腔接种对小白鼠具有高致病性。乳鼠胃内投服试验和兔回肠结扎试验证明 ,该菌能产生热稳定肠毒素和热敏性肠毒素。总之 ,该菌是一株不表达K88、K99、987P的、能产生ST和LT的肠毒素型大肠杆菌。
关键词：
肠毒素型大肠杆菌 牦牛 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
王冉 韩晗 张辉 包红朵 王恬
分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈明 李超 王瑞 王秋华 黄婷 雷爱莹 陈福艳 甘西 余晓丽 梁万文
为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核表达载体pPIC9K-LTB;重组质粒经核苷酸测序确认并线性化后电转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选转化子,并以小量诱导表达筛选高效表达工程菌株,最后Western blotting分析甲醇诱导上清中的LTB及采用亲和层析和HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化蛋白。结果表明,PCR克隆获得的LTB编码DNA序列与GenBank登录DNA序...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
侯国珺 张民扬 汪晶 朱伟云
[目的]本试验旨在探究壳聚糖螯合锌对大肠杆菌K88攻毒仔猪盲肠微生物组成、代谢产物及炎症反应的影响。[方法]试验选取48头21日龄体重平均为6.21 kg的断奶仔猪,随机均分为4组:对照组(CON),饲喂基础饲粮;氧化锌组(ZnO),基础日粮中添加氧化锌(锌终含量1 600 mg·kg~(-1));壳聚糖螯合锌组(CS-Zn),在基础日粮中添加壳聚糖螯合锌(锌终含量100 mg·kg~(-1),壳聚糖终含量766 mg·kg~(-1));壳聚糖组(CS),在基础日粮中添加壳聚糖,壳聚糖含量与壳聚糖螯合锌组相等。在试验15 d时,每组随机选取6头仔猪,每头口服10~(10) CFU的大肠杆菌K88培养液进行攻毒,攻毒48 h后屠宰、取样,测定仔猪盲肠形态、盲肠食糜微生物组成和短链脂肪酸浓度以及盲肠黏膜中细胞因子浓度。[结果]与对照组相比,氧化锌和壳聚糖螯合锌处理均显著降低了仔猪盲肠隐窝深度,壳聚糖螯合锌组和壳聚糖组仔猪盲肠形态病理评分也显著降低。与对照组相比,饲粮中添加壳聚糖螯合锌和壳聚糖也均显著降低了仔猪盲肠微生物中变形菌门的相对丰度(P<0.05)。并且,壳聚糖螯合锌处理上调了乳杆菌属和普氏菌属9的相对丰度,下调了链球菌属和布劳特氏菌属的相对丰度。此外,与对照组相比,壳聚糖螯合锌组仔猪盲肠中乙酸、丁酸、总短链脂肪酸和乳酸含量显著上升,盲肠内容物的pH值显著降低,而壳聚糖螯合锌和壳聚糖组中丁酸、总短链脂肪酸和乳酸含量无显著差异。同时,壳聚糖螯合锌处理显著降低了盲肠黏膜中髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(INF-γ)水平。[结论]日粮中添加壳聚糖螯合锌可以改善断奶仔猪盲肠微生物组成,提高盲肠食糜中乳酸和短链脂肪酸浓度,降低盲肠黏膜中炎症因子浓度,有助于缓解大肠杆菌攻毒引起的肠道炎症反应。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘建奎 魏春华 侯喜林 余丽芸 王桂华
【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETECF41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的sIgA和IgG抗...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
由昭红 姜中其
提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.
关键词：
F18菌毛 产肠毒素型大肠杆菌 免疫原性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
夏炉明 孙建和 严亚贤
【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑,并采用PCR方法对噬菌体进行鉴定。同时测定8株溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导前以及诱导8、12、16h这4个阶段滤液中Stx毒素的表达量,毒素表达量采用WST-1细胞毒性检测试剂盒检测Vero细胞存活率。【结果】溶原性大肠杆菌O157经丝裂霉素C诱导后释放大量的Stx噬菌体颗粒。同时诱导后Stx毒素的表达量也显著增加,且随着诱导时间的延长毒素的表达量继续增加,但增加的...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
罗维 余兴龙 白霞 李润成 侯强红 尹恒
根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白.
关键词：
大肠杆菌 fedF基因 克隆 表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋隽 刘小兰 马海明 柳小春 何俊 黄生强 张细权
从猪13号染色体选取与肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体基因连锁的8个微卫星座位,研究不同猪种间的遗传特性,并分析不同基因型与F4受体黏附表型的关系.结果表明,2个地方猪种(五指山猪和沙子岭猪)和2个外来猪种(大约克猪和杜洛克猪)在8个基因座均具有高度多态性,杂合度为0.6117～0.7500,多态信息含量在0.5749以上.对大约克猪和沙子岭猪的F4黏附性和微卫星的关联研究表明,在微卫星座位S0223和SW207,2个猪种不同基因型在F4ab和F4ac血清型黏附表型上差异显著或极显著,可能F4ab和F4ac受体就位于这2个位点之间.这2个微卫星座位可望作为ETECF4抗性基因的遗传标记.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋隽 柳小春 刘鑫 贺长青 施启顺
为给筛选肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗病性的分子遗传标记提供依据,采用体外黏附测定大约克和沙子岭初生仔猪ETECF43种抗原型(ab,ac,ad)的黏附性,并进行了比较.结果表明,F4 ab黏附素对大约克猪和沙子岭猪均黏附强烈,而F4 ac则表现为不黏附;两个品种中均存在较高频率的F4 abR+-acR-;F4ad黏附素对沙子岭猪的黏附较强烈(0.400),而对大约克猪并不强烈黏附(0.242).上述结果也暗示,猪F4 ab受体和F4 ac受体存在较强的连锁,而与F4ad受体无此关系.
关键词：
肠毒素大肠杆菌 F4 体外黏附测定 仔猪
[期刊] 西南农业学报
[作者]
冉雪琴 王嘉福 吴拥军 叶在荣 王宇波
以一对合成的特异性寡核苷酸片段为引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），对不同血清型的ＥＴＥＣ以及１０４份牛、猪及鸡源大肠杆菌分离物中ＬＴ基因片段进行扩增。３株已知血清型ＥＴＥＣ、１３份牛源、６份鸡源、１０份猪源的大肠杆菌扩增后可见一条３１４ｂｐ的片段，而非ＥＴＥＣ大肠杆菌、沙门氏菌等扩增后未出现这一片段。扩增产物用ＳｍａＩ酶解为１９０ｂｐ和１２４ｂｐ两个片段。印迹杂交表明，３１４ｂｐ扩增片段及ＳｍａＩ酶解的１２４ｂｐ和１９０ｂｐ片段均能与特异的ＬＴＢ基因探针杂交，Ｄｏｔ－印迹杂交与ＰＣＲ对样品的扩增结果相一致。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周传丽 刘铮铸 俞英 张勤
【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知,F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止,对ETEC导致仔猪腹泻的机理已经有了比较透彻的阐释。但对ETEC培养液的免疫原性尚未有研究和描述。论文以F4ac型ETEC为研究对象,探索其菌液上清(即培养液)对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的免疫刺激作用。【方法】首先收集F4ac型ETEC菌株200培养12h后的培养液,后经4℃,4 000 r/min,离心15 min收集培养液上清,将...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王保明 谭晓风
利用构建的油茶近成熟种子cDNA文库,分离鉴定了一条油茶亲环素基因的cDNA序列;该序列全长975bp(base pair),含有一个621bp的开放码框,编码207个氨基酸,将其命名为co-cyp(GenBank登录号:FJ377540)。该基因与其它物种的亲环素基因具有较高的同源性,结构分析表明该蛋白的二级结构以片层为主,并伴有α-螺旋、β转角和大量的无规则卷曲;其N端有一个强疏水性的信号肽序列,具有跨膜结构和较好的柔性;还具有N-连接糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、N-连接肉豆蔻酰位点、脯氨酸顺反异构酶标志序列、环孢菌素(CsA)结合位点(...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张淑霞 贺秀媛 崔保安 王建华
鸡传染性支气管炎病毒HN99株核蛋白(N)基因PCR产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切,克隆入大肠杆菌原核表达载体pMAL-p2X,构建重组表达质粒pMAL-p2X-N,转化大肠杆菌TB1并进行诱导表达。通过pMALTM融合蛋白纯化系统对表达产物进行非变性纯化,将纯化的N蛋白按常规方法免疫新西兰大白兔,制备兔抗鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的多克隆抗体,并用ELISA法检测其生物活性。结果表明,表达的重组核蛋门纯化后出现2条带,相对分子质量分别约为92和82 ku,与Western blot出现的2条蛋白带一致;纯化的重组蛋白经裂解因子作用后,出现2条蛋白带,相对分子质量分别为45和35 ku,与...
关键词：
鸡传染性支气管炎病毒 N基因 免疫活性
[期刊] 林业科学
[作者]
王学聘 戴莲 陈倩 田颖川
四株表达苏云金杆菌δ－内毒素蛋白基因的大肠杆菌对林业主要害虫杨扇舟蛾Ｃｌｏｓｔｅｒａａｎａｃｈｏｒｅｔａ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ），马尾松毛虫Ｄｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓｐｕｎｃｔａｔｕｓ（Ｗａｌｋｅｒ），舞毒蛾Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ），杨尺蠖Ａｐｏｃｈｅｉｍａｃｉｎｅｒａｒｉｕｓ（Ｅｒｓｃｈｏｆｆ）幼虫作用进行了室内生物测定，结果表明：该四株菌对上述四种昆虫幼虫均表现出较高的杀虫活性，而且能显著抑制昆虫幼虫的生长发育。
关键词：
苏云金杆菌,δ-内毒素,生物测定
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