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[期刊] 海洋水产研究
[作者]
孟宪红 孔杰 刘萍
对经典的单引物RAPD技术进行优化 ,确立了适合于多条引物 (2～ 4条 )同时参与同一反应的“高效RAPD”体系及扩增运行条件 ,不但实现了 1次操作检测更多位点、使多样本量RAPD检测变得相对省时省力 ,同时还可节省珍贵的实验样品。本文采用了具有高分辨能力的非变性PAGE 银染检测方法对RAPD产物进行检测 ,使一般经琼脂糖电泳检测仅能分辨出不足 10条谱带的RAPD产物可分辨出 15～ 30条清晰可见谱带。非变性PAGE 银染检测方法操作安全 ,银染后的凝胶可长期保存。
关键词：
高效RAPD PAGE 银染
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马士和 王利兵 李启新 李祥
以棉枯萎镰刀菌菌丝体加孢子提取的蛋白质为抗原免疫家兔制备的２种抗血清Ａｓ２、Ａｓ１０中成分复杂，用琼脂双扩散法和比较对流免疫电泳法测定特异性，交叉反应明显。Ａｓ２用木贼镰刀菌的异种抗原、Ａｓ１０用禾谷镰刀菌的异种抗原吸收排除非特异性成分后，抗血清的专化性提高，消除了交叉反应。特异性测定结果表明：利用此种经吸收后的抗血清检测棉枯萎镰刀菌可以准确地鉴定到尖孢镰刀菌种的水平，但不能区分专化型。
[期刊] 华北农学报
[作者]
易红梅 王凤格 赵久然 王璐 郭景伦 原亚萍
以192份玉米品种为材料,用7对SSR引物对毛细管电泳荧光检测和常规的变性PAGE银染检测两种SSR标记检测方法进行比较分析。结果表明,两种方法检测的SSR标记片段大小一致。毛细管电泳荧光检测法检测的结果更为精确、灵敏、高效,更适用于高通量材料的检测分析。对少量材料进行检测分析以及SSR标记的筛选时,使用常规的变性PAGE银染检测法更经济适用。
关键词：
玉米 SSR 毛细管电泳 银染
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓霞 姚美玲 张彬 柴同杰
为了探索一种快速、准确检测产气荚膜梭菌毒素型的方法,以便有效预防控制该病的流行和发生,利用SDS-PAGE方法,对通过ELISA鉴定的20株(A型16株、C型3株和D型1株)德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株,以及通过Multiplex-PCR鉴定的57株山东省疫区产气荚膜梭菌分离株外毒素蛋白的相对分子质量进行测定,以确定毒素的种类,进而确定菌株的毒素型。结果表明,产气荚膜梭菌标准株、德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株、山东省疫区产气荚膜梭菌分离株粗提外毒素的质量浓度分别为3.261,2.238~3.333,1.451~3.109mg/mL,精提外毒素的质量浓度分别为0.803,0.521...
[期刊] 华北农学报
[作者]
樊新萍 田建保 A.Bertaccini 王娟 杨晓宇
枣疯病是中国枣区最重要的病害之一,从表现症状的和未表现症状的3个枣品种(酸枣、辣椒枣和郎枣)的叶脉中提取核酸DNA。用13个引物(12个10 bp碱基和1个11 bp碱基)进行RAPD分析。只有引物AM-14从所收集的表现症状枣品种中扩增出400 bp的特异条带,而其他12个引物未有基因多样性;引物AL-07可以区分郎枣和其他2个品种,所有的样品重复2次,结果一致,与使用植原体特异性引物的常规PCR相比,对于检测不同枣品种枣疯病的枣植原体,RAPD技术是一个快速有效的方法。
关键词：
枣疯病 植原体 RAPD 检测
[期刊] 华北农学报
[作者]
葛荣朝 赵宝存 李薇 王莎莎 沈银柱 黄占景
应用玉米盐溶蛋白PAGE电泳方法检测了10个玉米品种的纯度及其杂交种的真实性。通过品种间的盐溶蛋白谱带的对比,发现其中有2条蛋白带是各品种所共有的,而除这些共有的蛋白带以外,各品种还具有一些特异条带。根据每个品种特有的蛋白条带,建立其特征条带图谱,可应用于该品种的相关鉴定工作。
关键词：
玉米 盐溶蛋白 聚丙烯酰胺凝胶电泳
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘胜利 王莹 何成华 施志玉 杨彦琼 赵士侠 吴康平 张海彬
建立了高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)定量检测饲料中镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA,又称F-2毒素)的方法。采用层析柱和免疫亲和柱结合净化提取液的方法,确定乙腈-水(体积比为9∶1)为最佳提取溶液,荧光检测的激发波长(λx)和发射波长(λm)分别为274 nm和440 nm。色谱检测条件:流动相为甲醇-水-乙腈(体积比为10∶46∶44);检测波长为激发波长274 nm,发射波长440 nm;柱温25℃,流速0.6 mL.min-1。HPLC-FLD对F-2毒素进行定量分析,线性回归方程为y=1 416 362.246x+2 771.577(R2=1.000 0...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
祁建民 周东新 吴为人 林荔辉 方平平 吴建梅
应用RAPD和ISSR标记,分别对来自非洲地区和中国的15份黄麻野生种(10个种),以及来自中国、印度、越南、日本等地的12份黄麻栽培品种基因组DNA的遗传多样性进行检测。结果表明:(1)参与分析的所有RAPD和ISSR引物都对DNA模板浓度的梯度变化不敏感,对比RAPD和ISSR在PCR反应中的稳定性,ISSR优于RAPD;(2)25个RAPD和ISSR引物分别扩增出329条和283条带,多态比率分别为89.36%和92.5%,显然,ISSR检测出的多态性条带的能力优于RAPD;(3)RAPD和ISSR标记检测同组供试材料种间或种内的遗传相似性系数(GS)范围,分别为0.48～0.98和0....
关键词：
黄麻 RAPD ISSR 遗传多样性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
钟艳平 师立松 周瑢 高媛 何延庆 方圣 张秀荣 王林海 吴自明 张艳欣
【目的】在芝麻种子中建立一种芝麻素高效提取检测技术，并将该技术应用于芝麻素含量变异检测和筛选高芝麻素含量的优异种质，为推动高芝麻素基础研究和育种奠定基础。【方法】以芝麻种子为原料，进行钢珠直径、粉碎时间、捣碎振幅和种子量等单因素试验，以80%的乙醇为提取溶剂，利用超声波的机械破碎和空化作用，对芝麻进行萃取；结合高效液相色谱法（HPLC）测定芝麻种子中的芝麻素含量；在单因素试验的基础上，进行Box-Behnken四因素三水平的响应面试验，建立芝麻素含量为响应值的二次多项式回归方程模型，并绘制响应曲面图和等高线图，分析影响芝麻素含量的主要因素及各因素间的交互作用，确定芝麻素含量检测的最优提取条件。利用该参数条件对1 151份地方资源和创新种质进行芝麻素含量的测定，筛选芝麻素含量≥9 g·kg~(-1)的高芝麻素种质，并送至农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心进行鉴定。【结果】建立的回归模型极显著（P钢珠直径>粉碎时间>种子量，其中，捣碎振幅与钢珠直径两因素之间的交互作用显著，捣碎振幅与粉碎时间的交互作用接近显著水平；超声波辅助提取芝麻素的最佳条件为：钢珠直径6.5 mm、粉碎时间225 s、捣碎振幅1 335 r/min、种子量0.20 g，在此条件下提取的芝麻素含量为4.601 g·kg~(-1)，与模型预测值4.633 g·kg~(-1)高度相符；从1 151份地方资源和创新种质中筛选出15份高芝麻素含量种质，最高含量为14.36 g·kg~(-1)，平均含量为12.35 g·kg~(-1)。【结论】建立了芝麻素高效提取技术，与传统方法相比，本方法只需0.2 g种子就能提取芝麻素，不仅提高了芝麻素的提取效率，还降低了样品的损耗，操作简单，能够精确检测芝麻种子中的芝麻素含量。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王玉娟 王保根 汪诗珊 余金保 沈玉英 房经贵
为更好地将RAPD技术应用于梅花品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,以16个梅花品种为实验材料,对琼脂糖凝胶电泳以及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测RAPD的PCR扩增产物的效果进行了比较,结果表明PAGE检测出谱带的总数量以及多态性谱带的数量均高于前者。根据2种电泳系统获得的标记信息构建的树状聚类图表明,PAGE检测的结果与传统梅花的分类情况完全一致。通过对随机挑选的25个片段进行克隆与测序的结果发现,25个片段都是对应引物的RAPD扩增产物。其中有4条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,而且可以扩增编码蛋白的基因片段。
关键词：
梅花 RAPD 多态性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
艾霞 王大菊
建立鸡蛋、牛奶中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法(HPLC)。样品中甲硝唑用乙酸乙酯提取、浓缩后用正己烷-乙酸乙酯(2∶1)溶解,Silica(SiO2)固相萃取柱净化,氮气吹干,流动相溶解,HPLC测定。固定相为C18色谱柱,流动相为pH 4.3醋酸缓冲液∶乙腈(88∶12,V/V),紫外检测波长325 nm。该方法可检出鸡蛋、牛奶中甲硝唑的最低定量限为1μg/kg,在空白样品添加浓度为1μg/kg时,鸡蛋、牛奶中甲硝唑的平均回收率分别为69%和75%,日间变异系数均小于15%。产蛋鸡连续饲喂含甲硝唑(250 mg/kg)饲料1周,用所建方法可检测到停药后14 d内鸡蛋中原药及代谢物残留。结果...
关键词：
甲硝唑 鸡蛋 牛奶 残留 HPLC
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李金花 苏晓华 张绮纹
取美洲黑杨（母本）和青杨（父本）杂交获得的Ｆ２群体样本８０株，应用ＲＡＰＤ标记检测与Ｆ２群体３个数量性状（苗高、地径和封顶期）有关的ＱＴＬｓ。在Ｆ２群体中，一年生苗高、地径和封顶期性状表现显著分离，基本符合正态分布。单因子方差分析检测出与苗高、地径和封顶期性状相关的７个、６个和３个标记座位，并计算了各标记对相关性状变异的贡献率。与数量性状相关的标记有不同的亲本来源。ｔ检验结果表明，各标记显带型和不显带型组性状均值的差异显著或极显著（两个标记除外）；与各性状相关标记的显带型或不显带型的频率，在各性状上的分布有异同。双因子方差分析结果表明，在与性状相关联的标记中，有两组ＱＴＬｓ互作组合与苗高性状相...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郝豆豆 张勇群 高玉花 雷鸣 武俊喜 拉多
【目的】从青稞种子中提取高质量的基因组DNA。【方法】以半粒无胚青稞种子和整粒青稞种子为材料,用6种不同的方法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,紫外分光光度计法检测DNA的浓度和纯度,并对提取的DNA进行了RAPD-PCR扩增检测,同时将剩下的半粒有胚青稞种子进行萌发实验。【结果】从半粒和整粒青稞种子中都可以提取到高质量的DNA,用提取的DNA作为RAPD-PCR扩增检测模板,得到的扩增产物条带清晰,多态性条带丰富,其质量满足RAPD分子标记的要求。【结论】高盐低p H法提取的DNA质
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王朝辉 周益军 范永坚 薛宝娣 吴淑华 程兆榜 张文荟
用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 ,表明该技术是研究RBSDV基因组多样性的简单有效的方法
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