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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵立红 陈德威 李军 秦秀慧
用禽脑脊髓炎病毒 (AEV) Van Rockel毒株接种 6日龄 SPF鸡胚 ,感染 11d后 ,分别收集鸡胚、绒毛尿囊膜及尿囊液 ,鸡胚剔除羽毛、眼球、爪和喙后与绒毛尿囊膜一起 ,制成匀浆 ,反复冻融 3次。通过 2次氟碳 (三氯三氟乙烷 )从全胚匀浆中萃取制备 AE琼扩抗原 (AGP- Ag)。用进口标准 AE AGP试剂进行标化 ,结果发现 :制备的 AE AGP- Ag与标准阳性血清之间有清晰、致密的沉淀线 ,并与标准 AE AGP- Ag的沉淀线完全吻合 ,表明两者的沉淀反应一致 ,从而建立了 AE AGP- Ag制备新方法——“全胚双氟碳法”。其制备 AEAGP- Ag有如下特点...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨建民 秦卓明 赵继勋 苏敬良
本研究在已制备的 AEV单抗基础上建立了检测 AEV抗原的直接 Dot- ELISA方法。该方法对 AEV最低检出量为 8.0 3μg.m L-1。人工感染 1日龄 SPF鸡 ,取临床发病鸡 (6～ 1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本病原阳性检出率分别为 :脑 98% ,胰 94% ,十二指肠 80 % ,腺胃 85%。对 1 0 0份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 90 %。对 1 0份 AEV病原分离阳性样品检测阳性率为 1 0 0 %。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵立红 乔健 田勇 朱立龙 陈巨清
为探讨肉种鸡免疫禽脑脊髓炎 (AE)弱毒疫苗的抗体变化规律及其与后裔雏鸡对禽脑脊髓炎病毒 (AEV)易感性的相互关系 ,本研究用琼脂扩散试验对 14周龄免疫禽脑脊髓炎 (AE)弱毒疫苗的 5群艾维茵父母代肉种鸡 ,其中 1群于 34周龄加免AE油乳剂灭活苗 ,从 2 0至 6 0周龄对其AE抗体进行动态监测。结果发现 :1)单免弱毒疫苗的 4群种鸡 ,其AE抗体阳性率呈双低谷曲线变化规律 ,32周龄之前较高 ,为 95 %～ 83.4 % ;36～ 4 0周龄降至 6 7.5 %～ 71.1% ,最低可至 5 6 .7% ;4 4周龄转而升至 80 %以上 ,4 8～ 5 2周龄再度降至 5 ...
关键词：
肉种鸡 禽脑脊髓炎 弱毒疫苗 抗体
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘爵 张杰 刘有昌 张方亮 周蛟
进行了 禽脑脊 髓炎病 毒 Ｌ２ Ｚ 株在 Ｂ Ｇ Ｍ７０ 传 代 细胞 系上 培 养特 性的 研 究。该 毒 株 在细胞上盲 传３ 代后 能产生明 显的细 胞病变，并 且传代 过程中 细胞 病变 稳定 地出 现。利 用琼 脂扩 散试验、免疫 荧光试 验、免疫酶 试验及 负染电镜 观察 研究 表 明， Ｌ２ Ｚ 株 接种 Ｂ Ｇ Ｍ７０ 细 胞具 有良 好 的增殖特性 ，并且病 毒是在细 胞浆中 进行复制 。该研究 报道禽 脑脊髓 炎病 毒能 成功 地在 传代 细胞 系上培养增 殖。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
焦铁军 李河林 张浩 李健强
检测了4批自制禽脑脊髓炎冻干活疫苗的安全性和最小免疫剂量,并对疫苗进行了病毒含量测定和攻毒保护试验。结果表明,鸡接种疫苗后精神、食欲及发育均正常,疫苗安全性良好;接种病毒剂量为500 E ID50时,可使免疫鸡产生可靠的免疫力,抵抗AEV VR株强毒的攻击,降低鸡群发病率,所以该疫苗的最小免疫剂量≤500 E ID50/羽。4批疫苗病毒含量均大于103.5E ID50/羽份,攻毒后保护率均在87.5%以上。
[期刊] 华北农学报
[作者]
马强 张二芹 张同旭
以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引物,经PCR扩增获得了大小约810bp的产物。VP1基因和pBI121植物表达载体用SmaⅠ和SacⅠ双酶切,经纯化后连接,再转化到EHA105农杆菌中,酶切和测序鉴定结果表明,成功地构建了重组质粒pBI121-VP1,为进一步利用转基因植物生产VP1蛋白奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
姜北宇 刘月焕 郑世兰 景小冬 姚颖 白丽萍
用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76 V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒,分别接种鸡胚或鸭胚,制备各种病毒抗原液,经福尔马林灭活后,采用FILTRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩,然后按一定比例混合,以司本80及吐温80为乳化剂,10号白油为佐剂,制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定,证明本疫苗安全、无任何副作用;免疫10-14 d后产生免疫力;ND部分效检,攻毒100％保护,每羽份含ND效价达50-123 PD50;IB部分效检,免疫21-28 d后攻毒保护率达80％-100％,IB HI效价≥1:64;...
关键词：
鸡 四联疫苗 免疫 浓缩
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨笑笑 杨兴淼 刘亚林 曹瑞兵
[目的]制备日本脑炎病毒prM蛋白的特异性单克隆抗体，对进一步了解prM的结构和功能、开发特异性检测方法以及JEV prM蛋白的功能研究奠定基础。[方法]将prM基因克隆至原核表达载体pET-32a，诱导表达并纯化prM重组蛋白，随后将其免疫小鼠，通过细胞融合和亚克隆得到分泌抗prM单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备腹水并进行效价测定，通过Western blot和IFA验证其特异性，并进行空斑中和试验测定其中和活性，利用原核表达多段截短体蛋白确定单克隆抗体抗原表位并进行保守性分析，将其初步应用于感染检测及亚细胞定位分析。[结果]经细胞融合和三次亚克隆后成功获得1株能稳定分泌抗prM单克隆抗体的细胞株，命名为4H6，所制备的腹水效价可达到1∶1638400，经鉴定该抗体重链属于IgG2b，轻链为κ型。Western blot以及IFA试验均证明该抗体具有良好的特异性。空斑减少中和试验显示4H6不具备中和活性。通过表达截短蛋白鉴定出4H6所识别的抗原表位位于30GENRCWVRAIDVGYMC45，结合生物信息学分析发现该表位位于prM蛋白表面且在JEV不同毒株之间高度保守，有利于抗原抗体的直接接触。并成功将4H6初步应用于JEV感染检测及prM蛋白亚细胞定位分析。[结论] 成功制备1种高效且特异性的JEV prM蛋白单克隆抗体，抗原表位识别区位于pr，为分析prM蛋白在病毒复制过程中的生物学功能以及与其他病毒蛋白（如E蛋白或宿主分子）之间的相互作用提供有效工具。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭克美 冯悦平
采用微电泳和微量进样技术将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）分别引入鸡、麻鸡、鹅、鸽和鹌鹑脊髓的颈、胸、腰不同节段的一侧灰质内，逆行追踪了小脑核团向脊髓的直接投射。结果表明：在颈髓不同节段单侧引入ＨＲＰ后，上述动物对侧的小脑内侧核中出现了不同数量的标记细胞。其中在Ｃ３引入ＨＲＰ者出现的标记细胞最多，依次向后部各节段引入，标记细胞明显减少。在Ｃ９引入，仅有２例动物出现了１～２个标记细胞。胸段和腰段脊髓引入，尚未发现小脑核中出现标记细胞。从而说明：①禽类存在着小脑内侧核至脊髓的直接传导通路；②这一传导通路是向对侧投射的；③这一传导通路下行投射的范围只能抵达脊髓的颈中段
关键词：
家禽 小脑脊髓投射 辣根过氧化物酶
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭克美 冯悦平 张维民
应用微电泳逆行追踪技术，分别向北京鸭、麻鸭、鹅、鸡、鸽和鹌鹑脊髓的颈、胸、腰段的一侧灰质中导入辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），系统地研究了其孤束核至脊髓传导通路和细胞构筑。结果如下：在颈髓不同节段单侧灰质导入ＨＲＰ后，６种家禽延髓的双侧孤束核内都出现了大量的标记细胞；在胸髓单侧灰质中引入ＨＲＰ者次之；在腰髓引入ＨＲＰ后标记细胞数量较少。各组的试验结果都是同侧的标记细胞数量多于对侧。研究结果说明：禽类孤束核脊髓传导通路可长距离地直接下行投射到腰部，这一传导通路呈双侧性投射而以向同侧脊髓投射占优势。
关键词：
家禽 孤束核脊髓投射 辣根过氧化物酶
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈凡 何启盖 陈焕春 吴斌 刘正飞 Ross Bowle Pat Blackall
利用14个血清型的胸膜肺炎放线杆菌的标准菌株制备诊断抗原,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和对流免疫电泳,以标准抗血清作为参考,检验各种诊断抗原的灵敏性和特异性。分别用凝集抗原、超声波处理抗原和酚水抗原对来自湖北、湖南、江西、河南、安徽5省猪场的155份送检血清进行检测。结果表明可以对送检血清快速、准确地进行鉴别诊断和血清分型。
关键词：
胸膜肺炎放线杆菌 诊断抗原 血清分型
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柯翎 陈如敬 刘晓东 杨金先 龚晖
提取表达于四膜虫(Tetrahymena thermophila)细胞膜表面的多子小瓜虫抑动抗原。通过Western Blotting证实重组多子小瓜虫抑动抗原约为35.7 kD,其免疫原性与多子小瓜虫抑动抗原相似。以Quil-A作为佐剂,采用离心、超声波和透析等方法制备小瓜虫抑动抗原免疫刺激复合物(Iag-ISCOMs)。电镜观察可见Iag-ISCOMs经磷钨酸负染后呈直径30~40 nm的笼格状结构。免疫和攻毒试验证实Iag-ISCOMs对鳗鲡具有一定保护能力,攻毒后存活率达71.4%,对照组存活率为43.9%,结果表明,本实验成功制备了具有一定免疫原性的Iag-ISCOMs。
关键词：
小瓜虫 抑动抗原 免疫复合刺激物
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈力 胡鲲 姜有声 黄宣运 安健 杨先乐
为完善无色孔雀石绿的免疫检测方法,通过改良的碳二亚胺法,改造无色孔雀石绿结构类似物副品红半抗原。经过紫外分光法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、质谱法鉴定,偶联反应成功,且偶联比最高达37∶1。以副品红—牛血清白蛋白偶联物为完全抗原免疫Balb/c小鼠,产生针对无色孔雀石绿的多克隆抗体,效价可达6.25×105;取抗体与无色孔雀石绿进行竞争抑制测定,IC50可以达到11.8 mg/L。该抗体与孔雀石绿及副品红存在交叉反应,交叉反应率均为100%。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
谭舒华 王宗伟 韦登国
本文报道了新养羊区山羊脑脊髓丝虫病发生、流行、临床症状、病理变化和药物防治结果,并采用加强饲养管理、杀灭蚊蝇等综合防制措施加予控制,取得了明显的效果。1995～1997年共调查山羊15680只,其中发病556只,发病率为3.55%,死亡135只,发病致死率为24.28%.该病是由寄生在水牛、黄牛腹腔内的指形丝状线虫(S.digitata)的幼虫期(微丝蚴)寄生于山羊脑脊髓内而引起的一种寄生虫病。临床症状以腰部瘫痪、后肢无力以致卧地不起为主要特征;病理变化主要表现为幼虫进入脑脊髓后引起的移行症,以
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