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[期刊] 海洋水产研究
[作者]
马龙 潘克厚 石娟
α-双加氧酶是最近在植物体内发现的一种酶。它是一种血红素铁蛋白,对脂肪酸代谢起到非常重要的作用。本文参阅国内外相关资料,分别从该酶的物种分布和催化性质、酶蛋白的序列分析和结构特征以及该酶的生物学作用等方面进行了详细的综述,并对该酶的研究前景进行了展望,以期为相关的研究提供有价值的参考。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高忠 张荣铣 方敏
在作者及其实验室多年研究的基础上，针对今后的研究方向，对国内外在植物光合机构与功能衰老研究的进展进行综述和讨论。叶向导度、ＲｕｂｉｓＣＯ含量、ＲｕＢＰＣａｓｅ活性及光系统活性是老化过程中光合速率的内部限制因素。在衰老过程中，１，５－二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶活性降低，ＲｕｂｉｓＣＯ蛋白合成在转录和翻译水平上均受到抑制，同时ＲｕｂｉｓＣＯ蛋白也受到蛋白水解酶的分解；类囊体膜结构紊乱，膜上结合色素、脂类和功能蛋白受到破坏，光合电子传递链活性及光合磷酸化水平发生衰退。植物光合机构及功能衰老在多条途径上渐次展开，叶绿体内光合电子传递生成还原物质的过程与碳素、氮素同化及Ｍｅｌｈｅｒ反应利用还原物质过程之...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
单锴 周姗姗 李茜 周克茹 李春保
脂氧合酶（lipoxygenase，LOX）是一类含有非血红素铁的双加氧酶，在人体中广泛表达，并在多种活化的免疫细胞和肿瘤组织中上调。LOX催化长链多不饱和脂肪酸形成相应的氢过氧化物。这些代谢物在生理条件下调节血管功能、肾脏功能、生殖系统功能和免疫防御，而在病理条件下导致疼痛、发热和炎症，进而在多种急、慢性疾病中起着重要作用。目前已经在人类体内发现6个LOX基因，其可以通过可变剪切和蛋白修饰机制形成更多种效应蛋白。6大类LOX分别具有不同的表达谱、不同的底物偏好性和不同的代谢产物，因此也具有不同的功能分工。本文从LOX的分布和代谢特性入手，综述了它们与炎症相关疾病的关系，从生物化学角度介绍了LOX的表达与活性调控机制并展望了靶向LOX功能缓解相关病理损伤的营养学和临床医学策略。
关键词：
脂氧合酶 炎症 多不饱和脂肪酸 脂质介质
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王昊 尹莲 刘洁霞 贾丽丽 丁旭 沈迪 冯凯 徐志胜 熊爱生
【目的】研究类胡萝卜素裂解双加氧酶基因AgCCD4在不同颜色芹菜中的基因型及相对表达量,结合类胡萝卜素含量测定,分析AgCCD4对芹菜组织中类胡萝卜素积累的影响,为进一步研究CCD亚家族基因在不同颜色芹菜组织着色中的作用奠定基础。【方法】采用同源比对法检索芹菜基因组中的CCD家族基因AgCCD4。从‘津南实芹’‘黄太极’‘紫杆一号’和‘赛雪’4种不同颜色芹菜中分别克隆获得芹菜类胡萝卜素裂解双加氧酶基因AgCCD4。对芹菜AgCCD4的蛋白氨基酸序列组成、蛋白质理化性质、亲缘关系、空间结构等进行分析,预测其保守结构域和二级结构以及建立三级结构模型。采用荧光定量PCR技术检测AgCCD4在不同颜色芹菜不同组织中的表达水平。采用超高效液相色谱(UPLC)对4种颜色芹菜的叶片、叶柄和根中叶黄素和β-胡萝卜素的含量进行测定。采用农杆菌介导的瞬时表达转化法,研究AgCCD4蛋白在烟草表皮细胞中的亚细胞定位。【结果】序列分析结果表明AgCCD4包含1个长度为1 779 bp的开放阅读框(ORF),编码592个氨基酸。‘赛雪’中AgCCD4的核苷酸序列与其他品种相比存在18个碱基和9个氨基酸位点的差异,蛋白质相对分子质量分别为65.07 kD和65.12 kD,等电点分别为6.03和5.95。进化树分析表明,芹菜AgCCD4与菊科的向日葵和莴苣CCD4进化关系较近。AgCCD4蛋白的二级结构中包含多个α-螺旋和无规则卷曲,三级结构主要以β-折叠为主。亚细胞定位分析表明AgCCD4是一个定位在叶绿体上的蛋白。对4种颜色芹菜叶片、叶柄和根中叶黄素和β-胡萝卜素的含量进行测定,结果显示芹菜根中均未检测到叶黄素和β-胡萝卜素,叶片中叶黄素和β-胡萝卜素含量均以‘津南实芹’最高,分别为1 102.58μg·g-1 DW和241.92μg·g-1DW,‘紫杆一号’最低,分别为57.12μg·g-1 DW和45.65μg·g-1 DW。在叶柄中,仅在‘黄太极’中检测到β-胡萝卜素,叶黄素也只在‘津南实芹’和‘黄太极’中被检测到。荧光定量PCR结果显示,AgCCD4在芹菜叶片中表达量最高,在根中最低。‘紫杆一号’和‘赛雪’叶片中AgCCD4的相对表达量相似,都显著高于‘津南实芹’和‘黄太极’。【结论】本研究从4种颜色芹菜中分别克隆得到AgCCD4,其中‘赛雪’的基因序列和其他品种存在差异,其蛋白均含有RPE65保守结构域。AgCCD4表达量在芹菜不同组织中具有显著差异。芹菜中AgCCD4表达量与类胡萝卜素含量呈负相关。植物体中类胡萝卜素的含量和种类影响植株的颜色变化,AgCCD4可能通过降解类胡萝卜素来调控芹菜组织着色。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
汤雨洁 田祥瑞 胡波 黄河 薛圆 苏建亚
[目的]采用原核表达技术对甜菜夜蛾的黄素单加氧酶(FMO)进行体外表达,获得具有活性的FMO酶,在此基础上开展对杀虫剂的代谢功能研究。[方法]通过将甜菜夜蛾FMO基因的开放阅读框构建到pET32a原核表达载体中,在大肠杆菌中表达目的蛋白,利用该载体的His标签使用镍柱对表达蛋白进行纯化,再通过咪唑梯度洗脱得到纯化的重组FMO酶蛋白。采用还原型辅酶Ⅱ(NADPH)法测定FMO酶的活性以及对杀虫剂的氧化活性,并用HPLC法分析FMO酶催化杀虫剂降解的能力,最后用液质联用技术鉴定代谢产物。[结果]通过原核表达技术成功得到可溶性的SeFMO2与SeFMO3酶,这2种酶对FMO的模式底物甲巯咪唑与苄达明均具有氧化活性,SeFMO2与SeFMO3对甲巯咪唑S-氧化的代谢动力学参数K_m值分别为37.59与3.00μmol·L~(-1),对苄达明N-氧化的K_m值分别为165.98与17.71μmol·L~(-1)。对模式底物的S-氧化活性与N-氧化活性均是SeFMO3高于SeFMO2,2种酶的S-氧化活性均高于N-氧化活性。SeFMO2和SeFMO3对毒死蜱、硫双威以及溴虫腈具有一定的代谢活性,HPLC分析表明这2种FMO酶均能催化这3种杀虫剂的氧化降解,SeFMO2对毒死蜱、溴虫腈和硫双威的降解率依次是11.8%、11.5%和27.8%,SeFMO3对它们的降解率分别是28.8%、23.1%和30.2%,其中对硫双威的降解作用较强。对硫双威代谢产物的鉴定表明:FMO主要催化硫双威的硫醚氧化,形成硫双威的砜化合物。[结论]甜菜夜蛾黄素单加氧酶对外源物具有S-氧化活性与N-氧化活性,对某些杀虫剂具有氧化代谢能力,是昆虫的重要解毒酶系之一。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
马玉超
胆固醇氧化酶是细菌FAD依赖的黄素蛋白,能够高效地氧化固醇类物质的3β-羟基基团,完成胆固醇代谢的第一步反应。胆固醇氧化酶具有重要的应用价值:在生物催化方面,可用于生产多种固醇类物质;农业上作为抗虫蛋白,对棉铃虫幼虫具有显著的抗虫效果;医学上用于检测血清中胆固醇的含量。这些重要的应用促进了人们从不同来源的微生物中分离、纯化胆固醇氧化酶,详细研究其结构与功能的关系。本文综述了产胆固醇氧化酶的微生物种类、酶的类型与结构、酶的催化机理及胆固醇氧化酶的应用等的最新研究进展,并展望了未来的研究重点。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈舟舟 齐继艳 张亮 徐晟 沈文飚
建立并改进了植物血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)活性的微量比色测定法。测定体系的最佳反应条件为:最适pH7.2,最适温度37℃,加入5~20μL酶液量(总蛋白量控制在5~10μg),酶促反应时间为60 min。并通过比较正常生长和盐胁迫条件下多种植物的HO活性变化,初步证明HO具有盐胁迫诱导特性。
关键词：
酶活性测定 血红素加氧酶 盐胁迫诱导特性
[期刊] 水产学报
[作者]
孙盛明 祝孟茹 潘方艳 王柠 傅洪拓 戈贤平
氧是众多生物赖以生存的首要条件,动物处于低氧环境时,机体的生化反应和生理功能也会相应发生改变,严重时可引起一系列机体损伤甚至死亡。低氧胁迫下的应激机制是涉及多基因参与的复杂的生理调控过程,与哺乳动物相比,甲壳动物的低氧应激与分子适应机制尚不明晰。本文分析了低氧胁迫产生原因,并从生理层面阐述了甲壳动物对低氧胁迫的应激反应和生理适应策略、以及低氧对甲壳动物的行为、存活、抗氧化能力和代谢的影响,又从HIF-1信号通路、AMPK信号通路以及细胞凋亡通路阐述了甲壳动物对低氧环境胁迫的分子响应机制。本文在总结低氧信号传导及其调控通路研究进展的基础上,提出了低氧胁迫对甲壳动物影响的预防和调控手段,包括选育耐低氧新品种和营养调控手段,以期为人们更深入地理解甲壳动物低氧应激和分子适应机制提供理论参考。
关键词：
甲壳动物 低氧 缺氧诱导因子 分子调控
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯晓晓 刘越 孙洪波 张琳霞 李华 马徐 唐丽
酮是一种特殊的黄酮类化合物,也是藏药中含量最高、生物活性较强、药用价值和经济价值丰富的一类有效成分。目前认为,3-羟基苯甲酸辅酶A连接酶、二苯甲酮合成酶和酮合成酶是酮生物合成路径中的关键酶。文章对酮的结构类型、功能及其在植物中的分布,以及酮的生物合成路径与关键酶进行综述,并对相关研究进行了展望。
[期刊] 世界农业
[作者]
高武军 孙毅 王景雪 李润植
几丁质酶是广泛存在于微生物和植物体内的一类蛋白质，它能催化真菌细胞壁的重要成分———几丁质的水解，从而抑制真菌的生长增殖，提高植物的抗真菌能力。近年来，随着对其作用机理、生化性质、表达调控的深入研究，用几丁质酶基因转化植株正日益成为植物防御真菌病害的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘晓丛 曾丽 刘国锋 彭勇政 陶懿伟 张邀月 王梦茹
【目的】克隆万寿菊(Tagetes erecta L.‘Scarletade’)类胡萝卜素裂解双加氧酶基因CCD1(TeCCD1),分析其序列特征和表达特性,为阐明其在类胡萝卜素降解途径中生物学功能及进一步探讨万寿菊花色形成机理提供理论基础。【方法】依据万寿菊花蕾转录组数据,利用同源序列比对结果设计引物,结合RT-PCR技术克隆获得万寿菊CCD1 cDNA全长,分析其序列特征;利用Real-time PCR分析舌状花未开花蕾、半开花蕾、开放的头状花序和完全开放的头状花序4个不同发育时期的基因表达特性。【结
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李建运 姚国琼 王飞 朱文 李子涵 孙正海 辛培尧
【目的】多巴双加氧酶(4,5-DOPA dioxygenase extradiol)是甜菜色素生物合成途径的关键酶之一，能催化多巴分解形成甜菜醛氨酸，也是最可能与三角梅最终的花色形成相关的酶蛋白。克隆三角梅多巴双加氧酶基因的开放阅读框(ORF)，对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析，探讨三角梅花色变化机理和甜菜色素代谢途径。【方法】以三角梅品种‘绿叶樱花’的苞片为材料，提取其RNA，并进行逆转录，之后快速转化完成基因的克隆和基因PCR扩增，最后对其编码的氨基酸序列进行保守区预测、信号肽分析、磷酸化位点预测、跨膜信号预测、同源性比对、构建系统进化树以及二、三级结构预测，研究其氨基酸序列的结构和功能。【结果】‘绿叶樱花’的多巴双加氧酶基因ORF序列长801 bp，编码266个氨基酸。ORF序列所编码的氨基酸序列具有cd07363保守结构域，其编码蛋白是一种稳定的酸性亲水蛋白，分子量为29 734.76 kD，等电点为6.26，二级结构包含了11个α螺旋、7个β转角、20个β折叠结构，具有4个磷酸化位点，没有跨膜结构，可能只在细胞质内发挥作用。该序列还与66个序列高度同源，与同科的‘金心双色’、胶果木和梭房叶子花有着相同的进化分支，符合自然进化规律。【结论】‘绿叶樱花’多巴双加氧酶开放阅读框ORF的氨基酸序列属于第三类雌二醇双加氧基因家族，具有该基因家族具有的保守氨基酸序列，表明多巴双加氧酶基因在生成甜菜色素植物中具有独特的保守性，且属于稳定、酸性的亲水蛋白，没有跨膜结构，可能只在细胞质内发挥作用。三角梅中控制花色变化的主要是甜菜色素，研究三角梅甜菜色素合成途径中的关键酶，解析其甜菜色素的合成代谢机制，可为三角梅花色形成机制提供理论参考，有望在今后的工作中，利用转基因手段丰富三角梅花色。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王建起 曹文广
肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)又称生长分化因子8(growth differentiation factor 8,GDF-8),属于转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)超家族成员,由McPherron等在1997年筛选小鼠肌肉cDNA文库时首次发现。目前已研究过的不同哺乳物种间的MSTN基因结构均含3个外显子和2个内含子,且成熟肽氨基酸序列的差异均在3个以内。MSTN在多个组织中表达,包括心肌、脂肪、胎盘、乳腺、子宫、嗅觉神经细胞、肝、脾、肺和肾等,主要在骨骼肌中高水平表达。MSTN的成熟包括由信号肽酶、前蛋白转化酶Furin和金...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
芮琪 张列峰 徐朗莱
研究了小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rub isco,EC 4.1.1.39)大亚基(LSU)由53 000裂解为50 000的反应。结果显示,成熟叶片的粗提液在pH 5.5的条件下反应后能检测到50 000的裂解产物,而暗诱导衰老叶片的粗提液在pH 7.5的条件下也能发现LSU的这一降解。分别从成熟叶片和衰老叶片中提取叶绿体,以其裂解液为反应体系研究LSU由53 000裂解为50 000这步反应的细胞器定位。结果显示,衰老叶片中的叶绿体裂解液在pH 7.5时反应1 h后能检测到50 000降解产物,而成熟叶片叶绿体裂解液在pH 5.5和pH 7.5的条件下反应后均未检测到LS...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
宋健民 李豪圣 戴双 刘爱峰 刘建军 赵振东
针对目前有关淀粉理化特性方面的研究相对落后的状况,对相关文献进行分析。首先分析小麦籽粒淀粉需要的几种关键酶:ADP-葡萄糖、淀粉合成酶、淀粉分支酶和淀粉脱分支酶,其次对国内外小麦淀粉合成酶研究方面的进展进行了综述。
关键词：
小麦淀粉 关键酶 淀粉合成酶 表达调控
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