【摘要】【目的】为研究ＣＳＦＶ ＲＮＡ在体外感染细胞中的分布及定位，建立了一种准确、敏感的ＲＮＡ可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对ＧｅＮ ＢＡＮｋ中公布的ＣＳＦＶ、ＢＶＤＶ和ＢＤＶ全序列，避开ＢＶＤＶ和ＢＤＶ的同源区，设计了ＣＳＦＶ ＲＮＡ及内参基因β－ＡＣｔｉＮ的特异探针。以ＣＳＦＶ中等致病力毒株（Ｈｅ ＢＨＨ１／９５）为参考毒株，在Ｐｋ１５细胞中培养病毒，加入ＲＮＡ可视化原位杂交的特异探针和相应试剂，采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素，采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶ｋ浓度和甲醛固定时间，建立了ＣＳＦＶ ＲＮＡ可视化原位杂交．．．