人源肺细胞cDNA文库构建及与流感病毒NP互作宿主蛋白的筛选
2016-11-25分类号：S852.65
【部门】甘肃农业大学动物医学院 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室
【摘要】【目的】构建肺组织细胞Ｃａｌｕ－３及ａ５４９的高质量酵母ＣＤＮａ文库并筛选与流感病毒ＮＰ蛋白相互作用的宿主因子，为深入研究流感病毒ＮＰ蛋白功能、病毒复制及致病机制奠定基础。【方法】提取等量Ｃａｌｕ－３及ａ５４９细胞的总ＲＮａ，混合后反转录生成ＣＤＮａ，利用长距离ＰＣＲ（ｌＤ－ＰＣＲ）扩增合成ＤｓＣＤＮａ，用ＣＨＲＯＭａ ｓＰＩＮＴＭ＋ＴＥ－４００纯化柱纯化ＤｓＤＮａ，按照ＣｌＯＮＴＥＣＨ公司的ＭａｋＥ ＹＯｕＲ ＯｗＮ＂ＭａＴＥ＆ＰｌａＴＥ＂ｌＩｂＲａＲＹ ｓＹｓＴＥＭ操作程序，将带有同源臂的ＤｓＣＤＮａ与线性化Ｐ ＧａＤＴ７－ＲＥＣ共同转化Ｙ１８７酵母感受态细胞，涂布ｓＤ／－ｌＥｕ平板后于３．．．
【关键词】流感病毒 NP蛋白 cDNA文库构建 酵母双杂交系统 宿主因子
【基金】国家自然科学基金项目(31521005)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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