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SPF鸡胚St3galⅠ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

2016-04-28分类号:S852.65

【作者】陆玉建  吴信明  管宇  张松林  李树芳  韩文瑜  沈志强  
【部门】山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站  吉林大学博士后科研流动站  滨州学院生命科学系  山东省滨州畜牧兽医研究院  郑州大学生命科学院  
【摘要】为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3gAlⅠ),并将回收的片段插入到PMD18-t载体中。酶切PMD18-t-St3gAlⅠ和PCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3gAlⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在g418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3gAlⅠ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3gAlⅠ基因成功的插入到PCI-neo质粒,从而实现真核表达载体PCI-neo-St3gAlⅠ的构建。在g41...
【关键词】唾液酸  St3galⅠ基因  MDCK  转染  G418  PCR
【基金】山东省自然科学基金项目(ZR2012CL14); 山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研基金项目(BSH2014001)
【所属期刊栏目】华北农学报
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