抗红斑丹毒丝菌的rSpaa蛋白猪源单链抗体库构建及单链抗体淘选
2016-12-25分类号：S858.28
【部门】湖南农业大学动物医学院
【摘要】从免疫过ｒＳｐａａ的猪的脾淋巴细胞中提取总ｒＮａ，采用ｒＴ–ｐＣｒ技术反转录合成ＣＤＮａ。设计兼并引物扩增抗体重链可变区（ＶＨ）和轻链可变区（ＶＬ）基因片段，采用重叠延伸ｐＣｒ方法，将ＶＨ和ＶＬ通过ＬｉＮｋｅｒ连接成重组单链抗体（以下简写为ＳＣ ＦＶ）的基因片段。将ＳＣ ＦＶ的基因连接至噬菌粒载体ｐ Ｃｏｍｂ３ＸＳＳ，将重组载体电转化至宿主菌ＸＬ１－ｂＬｕｅ，并经辅助噬菌体ｍ１３ｋｏ７拯救，获得猪源噬菌体单链抗体库，库容约为２．５×１０６。以ｒＳｐａａ为靶抗原，经免疫亲和筛选，获得８株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组ＳＣ ＦＶ提供新途径，并为猪丹毒的免疫检测和综合防．．．
【关键词】猪源抗体库 单链抗体 红斑丹毒丝菌 噬菌体展示技术
【基金】国家自然科学基金项目(31272652); 现代农业产业技术体系建设专项(CARS–46–42)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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