降解布洛芬克隆菌株转座子插入突变体的构建
2016-03-14分类号：X172;Q78
【部门】西北农林科技大学生命科学学院 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室 西北农林科技大学旱区生物质能研究中心 陕西师范大学生命科学学院 西北农林科技大学资源环境学院
【摘要】【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株４Ｆ６中的邻苯二酚－２，３－双加氧酶基因（Ｃ２３Ｏ），构建其Ｔｎ５插入突变体，为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的３Ｇ７Ｔｎ５突变体菌株为基础，借助ｐＫＤ４６质粒的λ－ｒｅＤ同源重组酶，将转座子Ｔｎ５从菌株３Ｇ７中电击转化至４Ｆ６，消除ｐＫＤ４６质粒，敲除４Ｆ６菌株中的Ｃ２３Ｏ基因，测定出发菌株３Ｇ７、４Ｆ６及Ｔｎ５插入突变体菌株３Ｇ７－Ｇ９、３Ｇ７－Ｈ５、４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５间位苯环的裂解活性。【结果】４２℃条件下消除了Ｔｎ５插入突变体受体菌４Ｆ６中的ｐＫＤ４６质粒，构建了４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５突变体。Ｔｎ５转座子插入突变．．．
【关键词】可降解布洛芬福斯质粒 Tn5突变体 基因敲除
【基金】国家自然科学基金面上项目(31070453); 陕西省国际科技合作项目(2013KW-29); 西北农林科技大学科技创新专项(QN2011113);西北农林科技大学国际科技合作项目(A213021311)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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