His标签的水稻硅转运蛋白表达载体的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达
2016-09-18分类号：Q943.2
【部门】福建农林大学生命科学学院 福建省农业生态过程与安全监控重点实验室 福建农林大学作物科学学院
【摘要】以水稻根系ｃ ＤＮＡ为模板，ＰｃＲ扩增含Ｈｉｓ标签的Ｌｓｉ１基因开放阅读框，并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体Ｐ Ｐｉｃ９ｋ中，ＰｃＲ及测序验证重组质粒Ｐ Ｐｉｃ９ｋ－Ｌｓｉ１目的基因序列．将验证正确的重组质粒Ｐ Ｐｉｃ９ｋ－Ｌｓｉ１通过ｓＡｃⅠ酶切线性化，电转到毕赤酵母Ｇｓ１１５感受态细胞中，通过ＭＤ／ＭＭ板筛选出甲醇利用快型的酵母转化子，再通过不同浓度梯度的Ｇ４１８平板筛选多拷贝转化菌株．提取酵母基因组，ＰｃＲ验证正确的菌株即为工程菌（Ｇｓ１１５／Ｐ Ｐｉｃ９ｋ－Ｌｓｉ１）．用１％甲醇诱导该工程菌７２ Ｈ后，收集上清，经ｓＤｓ－ＰＡＧＥ检测到位于３２．８ ｋｕ处的目的蛋白即为ｓｉ转运蛋．．．
【关键词】巴斯德毕赤酵母 Si转运蛋白 pPIC9k 异源表达
【基金】国家自然科学基金项目(31271670,31300336); 教育部博士点基金项目(20133515130001)
【所属期刊栏目】福建农林大学学报(自然科学版)
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