镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定
2016-06-15分类号：Q943.2
【部门】广东医学院附属医院儿科 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 延边大学医学部护理学院
【摘要】为明确植物光合作用中镁离子螯合酶ＣＨＬＩ与ＣＨＬＤ亚基形成复合物ＣＨＬＩ－ＣＨＬＤ这一重要过程的机制，首先需要获得可溶性ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，添加异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。通过ＮＩ琼脂糖树脂（ＮＩ ｓＥＰＨａｒｏｓＥ ６ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）和谷胱甘肽琼脂糖树脂（ＧＬｕＴａＴＨＩｏＮｓＥＰＨａｒｏｓＥ ４ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｓＤｓ－ＰａＧＥ）和ＴＥＶ酶切试验验证目标蛋白。采用．．．
【关键词】CHLI CHLD 原核表达及纯化 蛋白复合物
【基金】国家自然科学青年基金项目(31300602); 广东省自然科学基金项目(S2013040012902); 吉林省卫生厅基金项目(2013082)
【所属期刊栏目】沈阳农业大学学报
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