油葵转化体系建立和重组人胰岛素的初步表达
2016-12-07分类号：S565.5
【部门】河北化工医药职业技术学院河北省高校生物反应器与蛋白类药物开发应用技术研发中心 河北中医学院
【摘要】为建立并研究利用油葵油体表达系统表达重组人胰岛素蛋白的方法，采用ＰＣＲ技术构建植物种子特异性表达载体，经花粉管通道用重组人胰岛素基因转化油葵。利用ＰＣＲ法检测目的基因的转化情况，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＷＥＳｔＥＲｎ ｂｌｏｔ对胰岛素蛋白的表达进行鉴定。结果表明，合成了重组人胰岛素与花生油体蛋白融合基因，并获得植物种子特异性表达载体Ｐ ｂＩｎｏＩ。花粉管通道转化油葵的适宜条件为，花柱剪切１／２，质粒浓度为５０～１００ ｎＧ／μｌ转化效率最高。ＰＣＲ结果显示，油葵花粉管通道法转胰岛素基因总转化率为３．２％，温室转化率（５．２０％）高于大田转化率（１．１２％）。获得ｔ１～ｔ５代转基因种子，播种为ｔ１～．．．
【关键词】转基因油葵 花粉管通道 重组人胰岛素 融合表达
【基金】河北省高等学校科学技术研究重点项目“利用转基因亚麻悬浮细胞表达阿朴脂蛋白米兰突变体”(ZD2014087);河北省高等学校科学技术研究重点项目“植物生物反应器的方法生产Reteplase的研究与开发”(ZD2010216)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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