【摘要】【目的】为获得高启动效率的乳腺特异启动子，对荷斯坦奶牛、娟姗牛和奶水牛的β－酪蛋白基因启动子进行比较研究。【方法】对Ｇｅｎｂａｎｋ中所收录的荷斯坦奶牛、娟姗牛和水牛β－酪蛋白基因启动子序列进行比对分析，按照保守序列分别设计启动子区和３′端ｐｌｏｙ ａ序列引物，同时设计人ＩＦｎα－２ｂ基因和ｅＧＦｐ－ｎｅｏ筛选序列引物并引入预先设计的酶切位点以方便载体构建。采集静脉血液，提取基因组Ｄｎａ。ｐＣＲ克隆β－酪蛋白基因启动子区和３′端ｐｌｏｙ ａ区，同时以实验室保存质粒为模板克隆人ＩＦｎα－２ｂ基因和ｅＧＦｐ－ｎｅｏ筛选序列。测序正确后，将各片段按设计顺序依次插入ｐ ＭＤ１８－Ｔ骨架中，构建成ｐ ＨＳ．．．