检测牛感染犬新孢子虫的TaqMan-MGB Real-TiMe PCR方法的建立
2016-12-15分类号：S817.12
【部门】新疆农业大学动物医学学院 伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心 新疆巴音郭楞职业技术学院生物工程系
【摘要】为建立牛感染犬新孢子虫的Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测方法，根据犬新孢子虫ＮＣ２基因保守序列设计特异性检测引物和ｔａｑｍａＮ－ｍＧＢ探针，建立新孢子虫病ｔａｑｍａＮ－ｍＧＢ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测方法。ＰＣＲ扩增产物约为１５０ＢＰ，与预期片段大小相符；Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ扩增表明，Ｃｔ值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系；当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性ＤＮａ时均为阴性；经３Ｄ数字ＰＣＲ判定，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ方法的最低有效检测量为６．４１拷贝／μｌ，灵敏性是常规ＰＣＲ的１ ０００倍；重复性试验的组内平均变异系数为１．１０８％，组间为２．７３２％；．．．
【关键词】新孢子虫病 Real-time PCR 3D数字PCR TaqMan-MGB探针 Nc2基因
【基金】新疆维吾尔自治区科技成果转化专项项目(201454129); 巴音郭楞蒙古自治州科学技术研究“星火”项目(201403); 库尔勒市重点科技计划项目(2013051108)
【所属期刊栏目】中国农业大学学报
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