大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化
2016-08-28分类号：S634.1
【部门】河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室
【摘要】目的序列长片段ＰＣＲ产物可作为ＦＩＳＨ技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而，传统ＰＣＲ技术对于５ ｋｂ以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段ＰＣＲ有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段ＰＣＲ产物以用于ＦＩＳＨ研究，根据大白菜Ａ０３染色体顶端无重复序列区段设计了８０对长片段ＰＣＲ引物，从基因组ＤＮＡ模板质量、Ｄ ＮＴＰＳ浓度以及退火温度和延伸时间方面对ＰＣＲ技术体系进行了优化。试验证明，选用幼苗嫩叶的基因组ＤＮＡ和ＬＡ ＴＡｑ ＤＮＡ聚合酶可以提高长片段ＰＣＲ引物的扩增质量和扩增效率；确定了适合５～１５ ｋｂ长片段ＰＣＲ的反应体系为２０μＬ：５０ Ｎｇ／μＬ．．．
【关键词】大白菜 长片段PCR 体系优化 单拷贝序列
【基金】国家自然科学基金项目(31501758;31171964); 农业部杰出人才培养计划项目(2130106); “十二五”农村领域国家科技计划项目(2012AA100202-5); 河北省百人计划项目(No.E2013100011); 河北省科技计划项目(16226304D)
【所属期刊栏目】华北农学报
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