花生AhPLDα基因植物过表达载体构建及对拟南芥的遗传转化
2016-12-28分类号：S565.2;Q943.2
【部门】河北省农林科学院粮油作物研究所河北省作物遗传育种实验室
【摘要】为了明确花生ＡｈＰＬＤα基因在响应干旱胁迫信号传导中的功能和作用机制，以ＡＢＡ处理的冀花４号花生叶片ｃ ＤＮＡ为模板，用ＲＴ－ＰｃＲ方法扩增ＡｈＰＬＤα１和ＡｈＰＬＤα２的全长ｃＤＳ片段，采用酶切－连接的方法分别将这２个基因定向克隆到植物表达载体Ｐ ＢＡＲ－Ｆ３上，冻融法将重组子转入根癌农杆菌ＧＶ３１０１，利用改良ＦＬｏＲＡＬ－ＤｉＰ法将过表达质粒转入拟南芥。菌落ＰｃＲ和酶切结果表明，ｃＡ ＭＶ３５Ｓ启动子驱动的过表达载体重组质粒Ｐ ＢＡＲ－ＡｈＰＬＤα构建正确。通过ＲＴ－ＰｃＲ和ｑＲＴ－ＰｃＲ验证，表明ＡｈＰＬＤα１和ＡｈＰＬＤα２基因整合到拟南芥基因组中并能过量表达，获得了阳性转基因纯合株．．．
【关键词】花生 AhPLDα基因 植物表达载体 转基因 干旱胁迫信号
【基金】国家自然科学基金项目(31201239;31301354); 河北省重点基础研究项目(10960122D); 河北省博士基金项目(F14E055610); 现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-14)
【所属期刊栏目】华北农学报
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