【摘要】【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶ＶＶ ＣＩＰＫ１０，分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式，为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能，探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得ＶＶ ＣＩＰＫ１０序列，设计特异引物进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，对克隆到的序列进行开放阅读框和保守结构域分析；构建原核表达载体，转化表达菌株后用ＩＰＴＧ进行诱导表达，收集菌体后裂解细胞，制备蛋白上样液，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳对表达产物进行分析，同时对融合蛋白进行可溶性分析；ＩＰＴＧ大量诱导表达融合蛋白，收集菌体后进行超声破碎细胞，用麦芽糖结合蛋白纯化柱纯化ＭＢＰ－ＶＶ ＣＩＰＫ１０融合蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧ．．．