尼罗罗非鱼3种SiglecS like融合蛋白在cOS-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究
2015-03-15分类号：S917.4
【部门】中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 上海海洋大学水产与生命学院
【摘要】为获得尼罗罗非鱼ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ融合蛋白，开展相关ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ蛋白的功能研究，深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的３个含ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ ＯＲＦ的克隆质粒，ＰｃＲ扩增获得Ｓｉｇｌｅｃ－１、Ｓｉｇｌｅｃ－４ｂ和Ｓｉｇｌｅｃ－１４ ｌｉｋｅ的膜外段序列，插入真核表达载体Ｐｃ ＤＮＡ３．１（＋）ｈ ｉｇ ｇ１ Ｆｃ中，双酶切、测序鉴定后转染ｃＯＳ－７细胞。ｑ ＰｃＲ、ＷｅＳｔｅＲＮ－ｂｌＯｔ对目的蛋白的表达进行检测；亲和层析法纯化融合蛋白，ＳＤＳ－ＰＡｇｅ电泳检测纯化效率。ｅｌｉＳＡ检测融合蛋白与ｇｂＳ的结合活性。测序结果显示，成功构建３个融合蛋白．．．
【关键词】尼罗罗非鱼 唾液酸结合型免疫球蛋白样凝集素 重组蛋白 真核表达 结合活性
【基金】国家“八六三”高技术研究发展计划(2011AA100404); 国家自然科学基金(31272688); 现代农业产业技术体系专项(CARS-49)
【所属期刊栏目】水产学报
文献传递
