【摘要】以四季耐抽薹生菜为材料，ＰＣＲ扩增并克隆了生菜质体ＲＰｏ Ａ基因的两侧翼的基因片段，利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段，构建了生菜质体定点转化载体Ｐ ＢＲＰｏ Ａ－ＧＦＰ，并进行了原核表达分析。结果表明，ＰＣＲ所扩增的两条基因区段大小为１．２与１．１ ｋＢ。进行序列分析后，经酶切、连接和转化，构建成含ＰＲＲｎ－ＧＦＰ－ＡＡｄ Ａ－ＴＰｓＢ Ａ表达盒的质体表达载体，酶切鉴定表明，所构建载体符合预期设计；ＧＦＰ基因能够在质体特异性启动子ＰＲＲｎ及终止子ＴＰｓＢ Ａ的调控下高效表达，表达量约占总可溶性蛋白的４５．６％，包涵体占菌体蛋白的４７．５％，该载体的构建为后期生菜质体转化体系的．．．