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多能性转录因子mRNA转染山羊胎儿成纤维细胞条件优化

2015-10-20分类号:S827

【作者】肖天荣  张蕾  邱峰龙  李伟  左其生  李东  李碧春  
【部门】扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室  
【摘要】【目的】为了优化外源多能性转录因子oct4、sox2、klf4、c-myc的mRNA转入山羊胎儿成纤维细胞(goat embryonic fibroblast,GEF)的条件,本试验针对转染试剂脂质体2000和转染方法进行研究。【方法】采用胰酶消化法,从山羊胎儿腿部肌肉组织中分离并获得了纯化的GEF细胞。根据m MESSAGE m MACHINE?T7 Ultra Kit试剂盒说明书,体外转录步骤主要有:1前期的质粒准备:首先用质粒小提试剂盒对摇菌获得的各体外转录载体质粒进行提取,随后对各体外转录载体目的基因下游进行单酶切,获得线性化质粒,最后用DNA纯化试剂盒对线性化的质粒进行纯化...
【关键词】mRNA  转染  山羊胎儿成纤维细胞  转录因子
【基金】转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08008-003); 江苏高校优势学科建设工程资助项目
【所属期刊栏目】中国农业科学
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