牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因载体构建与活性检测
2015-06-30分类号：S823;Q78
【部门】西北农林科技大学动物科技学院 国家肉牛改良中心
【摘要】【目的】构建牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其在C2C12细胞系中的表达活性。【方法】从牛外周血中提取基因组DNA,通过PCR方法从牛基因组DNA中克隆获得牛ATP5B基因的5′端转录调控区的1 898bp目的片段,通过设计引物逐段缺失后获得7个亚克隆,将其纯化后经SmaⅠ和KpnⅠ双酶切与pGL3-Basic载体连接,连接产物转化感受态细胞DH5α,得到牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,经脂质体基因转染法转染C2C12细胞系后,检测7个重组质粒的荧光素酶活性;运用在线软件Gen-omatix和TFSEARCH对ATP5B启动子区序列进行分析。【结果】成...
【关键词】牛 ATP5B基因启动子 双荧光素酶报告基因载体
【基金】国家自然科学基金项目(31272411); 国家“863”计划项目(2013AA102505,2011AA100307-02); 国家科技支撑计划项目(2011BAD28B04-03); 国家转基因育种专项(2011ZX08007-002); 国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-38); 陕西省科技统筹创新工程计划项目(2014KTZB02-02)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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