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一种适于PCR和LAMP检测的松木中松材线虫DNA快速提取方法

2015-06-15分类号:S763.18

【作者】苟大平  王曦茁  汪来发  田国忠  朱天辉  郭民伟  
【部门】四川农业大学林学院  中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室  
【摘要】【目的】本研究旨在探索快速、简便地直接从病木中提取松材线虫DNA的方法。【方法】运用Chelex-100结合异硫氰酸胍蛋白变性缓冲液建立新的高效快速提取微量木块中线虫DNA的方法,并通过普通PCR与环介导等温扩增(LAMP)对提取的DNA进行检测验证。【结果】建立了提取线虫DNA的新方法 Chelex-100法,并对影响提取效率的Chelex-100浓度、冻融时间和煮沸时间进行了优化。Chelex-100法最适Chelex-100终浓度为1.5%(W/V),最适冻融时间为5 min,最适煮沸时间为8 min。与传统的CTAB法和蛋白酶K法比较,Chelex-100法提取的DNA得率高,相同条件...
【关键词】松材线虫  DNA提取  Chelex-100
【基金】国家高技术研究发展计划课题(2012AA101503)
【所属期刊栏目】林业科学
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