类猪圆环病毒P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析
2015-08-28分类号：S852.651
【部门】江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心 南京农业大学动物医学院
【摘要】为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ...
【关键词】P1 VP1 昆虫杆状病毒表达载体系统 RT-PCR Western Blot 电镜
【基金】国家自然科学基金项目(31272574;30972184); 江苏省农业科技自主创新项目(CX(14)2045)
【所属期刊栏目】华北农学报
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