副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立
2015-05-18分类号：S852.61
【部门】福建省农业科学院畜牧兽医研究所
【摘要】采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.
【关键词】副猪嗜血杆菌 寡肽结合蛋白基因 克隆 表达 间接ELISA
【基金】国家公益性行业(农业)科研专项(NYHYZX07-034); 福建省公益类科研专项(2010R1025-2); 福建省农业科学院创新团队项目(CXTD-1-1306)
【所属期刊栏目】福建农林大学学报(自然科学版)
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