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拟南芥CPK10双元TAP载体的构建及原生质体表达

2015-08-28分类号:Q943.2

【作者】梁芸  魏凤菊  
【部门】河北农业大学生命科学学院河北省植物生理与分子病理学重点实验室  
【摘要】为了研究拟南芥CPK10发挥功能的分子机理,通过PCR扩增克隆了CPK10基因,将该基因连接到带有FLAG和HA标签的双元串联亲和层析载体上,构建成p CM1307-3FLAG-3HA-CPK10植物表达载体,进而通过PEG介导转化拟南芥野生型原生质体,表达约10 h,通过Western Blotting检测融合有FLAG和HA标签的CPK10蛋白的表达情况,结果显示,可以分别利用FLAG抗体和HA抗体特异检测到CPK10蛋白的条带。融合蛋白的成功表达,为进一步通过串联亲和纯化技术(TAP)筛选CPK10的互作蛋白奠定基础。
【关键词】TAP  双元表达载体  CPK10  原生质体转化
【基金】国家自然科学基金专项基金项目(31040052);国家自然科学基金青年基金项目(31101022); 中国农业大学开放课题(SKLPPBKF1504)
【所属期刊栏目】华北农学报
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