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一种构建载体的新方法:一步式混合胶回收连接法

2015-02-25分类号:Q78

【作者】李顺姬  胡珏  刘双清  成小文  黄国华  
【部门】湖南农业大学病毒研究所  湖南农业大学植物保护学院  植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室  
【摘要】以构建原核表达载体重组质粒G4FPAGB1为例,介绍了一种新的载体构建方法。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒G4毒株基因组上的Ha–FP–A片段用Hin dⅢ和Eco RⅤ双酶切,Ha–FP–B片段用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切,绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因片段用Eco RⅤ和XhoⅠ双酶切,载体质粒p Bluescript SK(+)用Hin dⅢ和Bam HⅠ双酶切。酶切产物经电泳检测后,将所有含目的片段的胶块切下,放在同一个离心管中进行DNA回收,得到的混合DNA产物直接加入连接酶进行连接、转化。结果表明,3个目的片段均成功连接到载体质粒上。本...
【关键词】载体构建  克隆方法  一步式混合胶回收
【基金】国家“十二·五”科技支撑计划项目(2012BAD27B02); 国家自然科学基金项目(31228020); 湖南省研究生创新性研究项目(CX2013B308)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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