基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用
2014-04-15分类号：S943
【部门】中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部渔药创制重点实验室 广东省水产动物免疫技术重点实验室 上海海洋大学水产与生命学院
【摘要】为了建立和应用可检测基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661 bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159 bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076)。结果表明,此方法在3.9×107~3.9×101拷贝/μL之间相关性较好,R2为0.992,最小检测量为4拷贝/μL;且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应。运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品,阳性结果为4份;而普...
【关键词】草鱼呼肠孤病毒 基因Ⅰ型 TaqMan Real-Time PCR 定量分析
【基金】国家科技支撑计划(2012BAD25B02); 国家自然科学基金(31202026); 水科院基本科研业务费(2014A06XK09)
【所属期刊栏目】水产学报
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