黄鳝雌激素受体α基因的克隆、抗体制备及初步分析
2014-07-15分类号：S917.4
【部门】中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室 姜堰市水产技术指导站 泰州市日盛生态农业发展有限公司
【摘要】对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄...
【关键词】黄鳝 雌激素受体 原核表达 抗血清 免疫组化分析
【基金】公益性行业科研专项(201003076); 国家自然科学基金项目(31200918); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2013JBFM02;2011JBFA12); 江苏省自然科学基金项目(BK2011184); 江苏省科技支撑计划(BE2013315); 江苏省水产三项工程项目(PJ2011-51)
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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