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虹鳟IgM重链恒定区的表达及兔抗血清的制备

2014-07-18分类号:S917.4

【作者】赵景壮  徐黎明  刘淼  曹永生  尹家胜  刘红柏  卢彤岩  
【部门】中国水产科学研究院黑龙江水产研究所  
【摘要】为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长Ig...
【关键词】虹鳟  IgM  基因克隆  抗血清
【基金】国家科技支撑计划(2012BAD25B02); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(HSY201204); 黑龙江省冷水性鱼类种质资源及增养殖重点开放实验室(201104)
【所属期刊栏目】水产学报
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