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捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析

2014-03-27分类号:S852.7

【作者】马春晓  张振超  李祥瑞  徐立新  宋小凯  严若峰  
【部门】南京农业大学动物医学院  
【摘要】根据捻转血矛线虫精氨酸激酶(arginine kinase,AK)基因序列设计1对特异性引物进行RT-PCR,将得到的片段克隆到pMD19-T载体后进行序列测定和分析;将该基因的开放阅读框克隆到pET-32a(+)载体中,获得原核表达质粒pET32/AK并转化大肠杆菌BL21;重组子用IPTG诱导后用SDS-PAGE分析其表达情况;对重组蛋白变性、纯化后用梯度尿素对其进行连续透析复性,对复性后的重组蛋白用定磷法进行精氨酸激酶活性分析。结果表明从捻转血矛线虫总RNA中扩增出大小约为1 104 bp的DNA片段。该基因与GenBank中捻转血矛线虫AK基因的相似性为89%。SDS-PAGE电泳结果...
【关键词】捻转血矛线虫  精氨酸激酶  基因克隆  酶活性
【基金】中央高校基本科研业务费专项资金(KYZ201315); 国家自然科学基金项目(31001059)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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