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转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征

2014-07-17分类号:S511

【作者】牛东东  郝育杰  荣瑞娟  韦汉福  兰金苹  史佳楠  魏健  李雪姣  杨烁  奚文辉  武鹏程  刘丽娟  吴琳  刘斯奇  尹长城  刘国振  
【部门】河北农业大学生命科学学院  北京华大蛋白质研发中心有限公司  中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室  
【摘要】【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS...
【关键词】水稻  转基因植物  CaMV 35S启动子  GUS蛋白质  免疫印迹
【基金】科技部转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08012-006B); 北京市自然科学基金重点项目(5121001)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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