绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究
2014-03-27分类号：S858.26
【部门】新疆畜牧科学院生物技术研究中心 新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室 农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室 新疆农业大学农学院
【摘要】【目的】克隆绵羊IGF-1基因CDS区,构建绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体,分析IGF-1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF-1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒,并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞,并用重组慢病毒使其感染,建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线,分析过表达IGF-1对绵羊成肌细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518bp的IGF-1CDS区序列。成功构建...
【关键词】绵羊IGF-1基因 慢病毒表达载体 细胞生长曲线
【基金】国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100307)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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