从蛋白质和转录水平鉴定类猪圆环病毒P1存在ORF2和ORF3
2014-07-17分类号：S852.651
【部门】南京农业大学动物医学院 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
【摘要】【目的】确定类猪圆环病毒P1存在开放阅读框ORF2和ORF3;【方法】采用Trizol法,提取类猪圆环病毒P1分子克隆转染PK-15细胞的总RNA,纯化之后,分别用P1 ORF2和ORF3特异性引物进行RT-PCR,应用AxyPrepTM DNA凝胶回收试剂盒回收PCR产物,转化Trans5α感受态细胞,挑取单菌落,经PCR检测为阳性后测序。同时,利用rapid-amplification of cDNA ends(RACE)技术分别扩增P1病毒ORF2和ORF3的5′-与3′-末端。另外,根据P1 ORF2和ORF3的序列预测其B细胞抗原表位,采用标准的逐步固相合成法合成表位肽,与载体蛋白K...
【关键词】P1 ORF2 ORF3 RT-PCR RACE 免疫组化
【基金】国家自然科学基金(31272574,30972184)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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