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甜菜树ISSR-PCR反应体系的建立与优化

2015-01-15分类号:S647

【作者】吴春妍  杨冠松  张爱丽  申仕康  王跃华  
【部门】云南大学生命科学学院植物科学研究所  
【摘要】采用正交和单因素试验设计方法,对影响甜菜树ISSR-PCR反应体系的d NTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA及退火温度5个因素进行优化试验,建立了稳定的、可重复的甜菜树ISSR-PCR扩增反应体系。在20μl的反应体系中,d NTPs浓度为0.4mmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U,引物浓度为0.2μmol/L,模板DNA浓度为45 ng。扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,40个循环,最后72℃延伸8 min。这一优化体系的建立为深入展开甜菜树种质资源的遗传多样性研究奠定基础。
【关键词】甜菜树  ISSR-PCR  正交设计  单因素试验  优化
【基金】云南大学生命科学学院科学研究与人才培养开放基金(2012S202)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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