大豆翻译起始因子4E干扰片段克隆及其RNAi载体构建
2014-08-28分类号：S565.1
【部门】作物遗传与种质创新国家重点实验室 南京农业大学国家大豆改良中心 农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室
【摘要】应用基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)原理的大豆转基因技术,能够在转录水平沉默同源靶基因,这为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略。通过比对已报道的能与病毒VPg发生互作的10种植物的eIF4E氨基酸序列,确定出大豆eIF4E的保守区间为62~237位氨基酸序列,克隆出406 bp的干扰片段eIF4Ei(含58 bp特异性重组序列attB),进而采用GATEWAY技术构建了干扰表达载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-eIF4Ei。之后通过测序证实干扰片段eIF4Ei在载体构建过程中没有发生变异;酶切试验证实终端质粒的2个ccdB位点均被eIF4Ei置换;用启动子和终止子设计...
【关键词】大豆花叶病毒 eIF4E基因 RNA干扰 GATEWAY技术 载体构建
【基金】转基因生物新品种培育科技重大专项(2008ZX08004-004); 国家自然科学基金项目(31171574;31371646;31101164); 农业部大豆产业技术体系项目(CARS-004)
【所属期刊栏目】华北农学报
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