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小鼠cofilin-1基因及其真核表达载体的构建与体内外表达

2014-09-10分类号:Q78

【作者】李玲玲  张伟  杜蕊  宋玲珍  柴学军  胡新德  陈树林  赵善廷  
【部门】西北农林科技大学动物医学院  Institute of Anatomy and Cell Biology University of Freiburg  
【摘要】【目的】构建能够在神经系统中高效表达的小鼠cofilin-1野生型(Cfl1-wt)、活化型(Cfl1-S3A)、失活型(Cfl1-S3D)3种真核表达载体,并研究其在鸡胚脊髓神经元中的表达情况,为进一步探讨cofilin-1在大脑发育过程中对神经元迁移的影响奠定基础。【方法】从成年小鼠大脑组织中提取RNA,经反转录获得cDNA样本,RT-PCR扩增小鼠cofilin-1基因的CDS区,经引物设计引入点突变,扩增了野生型、活化型及失活型的cofilin-1基因片段,克隆入pCAG-MCS-myc真核表达载体中。经双酶切和测序鉴定后,转染CHO细胞,通过半定量RT-PCR和免疫荧光染色检测其在细...
【关键词】cofilin-1  Ser 3  磷酸化  去磷酸化  质粒构建  活体原位电转
【基金】西北农林科技大学人才专项基金项目(Z111021101)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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